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血清总蛋白测定



郧县中医院检验科 主题内容

生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-01 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 1 页 共 103 页

血清总蛋白测定

血 清 总 蛋 白 测 定 (双 缩 脲 法 )
1.实 验 原 理 : 凡 分 子 中 含 有 两 个 甲 酰 氨 基 ( -CONH2- )的 化 合 物 都 能 与碱性铜溶液作用,形成紫色复合物,这一反应称双缩脲反应 。蛋 白 质 分 子 中 有 许 多 肽 键 ( -CONH- ) 都 能 起 此 反 应 , 而 且 各 种 血 浆 蛋 , 白 显 色 程 度 基 本 相 同 .紫 色 复 合 物 在 540 nm 有 吸 收 峰 , 并 与 蛋 白 含 量成正比,通过与同样处理的标准蛋白比较可求出血清总蛋白含量。 因 此 ,在 严 格 控 制 条 件 下 ,双 缩 脲 反 应 可 作 为 血 浆 蛋 白 总 量 测 定 的 理 想 方 法 ,从 测 定 的 吸 光 度 值 计 算 出 蛋 白 质 含 量 。吸 光 度 的 大 小 与 试 剂 的 组 分 、 pH 值 、 反 应 温 度 有 关 。 蛋白质 + 铜离子 NaOH 紫红色络合物 2.标 本 采 集 及 存 放 :无 特 殊 要 求 ,最 好 用 禁 食 的 标 本 以 减 少 乳 糜 血 的 干 扰 。离 心 后 采 集 血 清 或 肝 素 抗 凝 的 血 浆 。血 清 标 本 20~ 25℃ 保 存 可 稳 定 6天 ; 4~ 8℃ 保 存 可 稳 定 4周 ; -20℃ 保 存 至 少 可 稳 定 1年 。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 北 京 利 德 曼 总 蛋 白 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下





含 32mmol/L 12mmol/L



酒石酸钾钠 硫酸铜

碘化钾 NaoH

30mmol/L 600mmol/L

3.2仪 器 及 参 数 : 3.2.1使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 , 具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 :

主波长 副波长 反应温度

540nm 700nm 37℃

分析方法 反应方向 S : R

终点法 向上 5: 300

4.质 量 控 制 : 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 在 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 , 3S 为 失 控 限 , 绘 制 质 控 图 , 判 断 是 否 在控(质控规则见生化室室内质控操作规程) 在控后方可进行标本 。 测定,若失控,查明原因并采取措施。 5. 计 算 方 法 : 样本 总 蛋 白 含 量 = 〓C0

△ At----------标 本 管 的 吸 光 度 变 化 ; △ As----------标 准 管 的 吸 光 度 变 化 ; C0----------- 标 准 液 的 浓 度 ; 6. 参 考 值 范 围 : 健 康 成 人 走 动 后 血 清 总 蛋 白 浓 度 为 64~ 83 g/L , 健 康 成 人 静 卧 时 , 血 清 总 蛋 白 浓 度 为 60~ 78 g/L。 7. 临 床 意 义 :血 清 总 蛋 白 有 生 理 性 波 动 , 立 体 位 由 于 体 液 分 布 的 原 直

因 ,血 液 相 对 浓 缩 ,而 长 久 卧 床 者 血 液 较 直 立 体 位 相 对 稀 释 。因 此 长 久 卧 床 者 血 清 总 蛋 白 比 直 立 活 动 时 约 低 3~ 5g/L; 新 生 儿 血 清 总 蛋 白 可 比 成 人 低 5~ 8g/L; 60 岁 以 上 老 人 约 比 成 人 低 2g/L。 ( 1)总 蛋 白 浓 度 增 高 :① 血 清 中 水 分 减 少 ,使 总 蛋 白 浓 度 相 对 增 高 。 凡 体 内 水 分 的 排 出 大 于 水 分 的 摄 入 时 ,均 可 引 起 血 浆 浓 缩 ,尤 其 是 急 性 失 水 时 (如 岖 吐 、 腹 泻 、 高 热 等 )变 化 更 为 显 著 , 血 清 总 蛋 白 浓 度 有 时 可 达 100~ 150g/L, 又 如 休 克 时 , 于 毛 细 血 管 通 透 性 的 变 化 , 由 血 浆 也 可 发 生 浓 缩 。慢 性 肾 上 腺 皮 质 功 能 减 退 患 者 ,由 于 钠 的 丢 失 而 致继发性水分丢失,血浆也可出现浓缩现象。② 血清蛋白质合成增 加 。大 多 发 生 在 多 发 性 骨 髓 瘤 患 者 ,此 时 主 要 是 球 蛋 白 的 增 加 ,其 量 可 超 过 50g/L, 总 蛋 白 则 可 超 过 100g/L。 ( 2) 血 清 总 蛋 白 浓 度 降 低 : ① 血 浆 中 水 分 增 加 , 血 浆 被 稀 释 。 如 因 各 种 原 因 引 起 的 水 钠 潴 留 。② 营 养 不 良 和 消 耗 增 加 。长 期 食 物 中 蛋 白 含 量 不 足 或 慢 性 肠 道 疾 病 所 引 起 的 吸 收 不 良 .使 体 内 缺 乏 合 成 蛋 白 质 的 原 料 ,或 因 长 期 患 消 耗 性 疾 病 ,如 严 重 结 核 病 、甲 状 腺 功 能 亢 进 和 恶 性 肿 瘤 等 ,均 可 造 成 血 清 总 蛋 白 浓 度 降 低 。③ 合 成 障 碍 ,主 要 是 肝 功 能 障 碍 。肝 脏 功 能 严 重 损 害 时 ,蛋 白 质 的 合 成 减 少 ,以 白 蛋 白 的 下 降 最 为 显 著 。④ 蛋 白 质 丢 失 。严 重 烫 伤 时 ,大 量 血 浆 渗 出 ,或 大 出 血 时 ,大 量 血 液 的 丢 失 ;肾 病 综 合 征 时 ,尿 液 中 长 期 丢 失 蛋 白 质 ;溃 疡 性 结 肠 炎 可 从 粪 便 中 长 期 丢 失 一 定 量 的 蛋 白 质 .这 些 均 可 使 血 清 总 蛋 白 浓度降低。 8.附 注 :

⑴ 干 扰 因 素 : ① 胆 红 素 ≤ 40mg/dl, 血 红 蛋 白 ≤ 200mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl,乳 糜 1.6%时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ② 酚 酞 、 溴 磺 酞 钠 在 碱 性 溶 液 中 呈 色 ,影 响 双 缩 脲 的 测 定 结 果 ,右 旋 糖 酐 可 使 测 定 管 混 浊 亦影响结果, 论上这些干扰均可吸光度太高, 影响测定的准确性。 理 可 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 100g/L , 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 1:1 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘 以 2。 ⑶危急值报告:无危急值。 ⑷ 注 意 事 项 : ① 血 清 蛋 白 质 的 含 量 一 般 用 g/L 表 示 , 因 为 各 种 蛋 白 质 的 分 子 量 不 同 ,不 能 用 mmol/L 表 示 。② 脂 类 高 的 血 清 ,呈 色 后 混 浊 不 清 ,可 用 乙 醚 抽 提 后 再 比 色 。 ③ 当 采 用 50g/L 的 浓 度 标 准 液 时 , 吸 光 度 的 变 化 范 围 在 0.10~ 0.35。 9 参考文献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 军 事 医 学 出 版 社 , 2006

郧县中医院检验科 主题内容

生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-02 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 5页 共 103 页

血清白蛋白测定

血 清 白 蛋 白 测 定 (溴 甲 酚 绿 法 )
1.实 验 原 理 : 白 蛋 白 是 血 清 中 清 蛋 白 , 几 乎 都 由 肝 细 胞 合 成 ,它 是 血 清中的主要蛋白质组分。 蛋白作为一个结合和转运分子在机体营养 白 状 况 中 起 着 重 大 作 用 。它 的 另 一 个 作 用 是 维 持 渗 透 压 ,血 浆 胶 体 渗 透

压 的 75%是 依 靠 白 蛋 白 维 持 的 。 血 清 白 蛋 白 的 测 定 常 用 于 病 人 状 态 的 非 特 异 监 视 。在 营 养 不 良 ,特 别 是 恶 性 营 养 不 良 的 病 人 中 可 看 到 很 低 水 平 的 血 浆 白 蛋 白 。另 外 ,血 液 稀 释 ,或 由 于 营 养 不 良 、肝 脏 疾 病 使 合 成 白 蛋 白 能 力 下 降 ,或 由 于 肾 病 综 合 征 、蛋 白 丢 失 性 肠 道 疾 病 等 可 引起大量白蛋白丢失的疾病均可导致低白蛋白。 白蛋白症则常见于 高 脱 水 或 血 液 浓 缩 。 血 清 中 的 白 蛋 白 与 溴 甲 酚 绿 在 pH=4.2 的 条 件 下 结 合 生 成 绿 色 复 合 物 ,溶 液 由 黄 色 变 为 绿 色 ,其 颜 色 深 浅 与 白 蛋 白 浓 度 成 正 比 ,通 过 在 630 nm 处 测 定 其 吸 光 度 ,与 同 样 处 理 的 白 蛋 白 标 准 比较,可求得血清中白蛋白含量。 白蛋白 + 溴甲酚绿 PH=4.2 绿色复合物

2.标 本 采 集 及 存 放 : 无 特 殊 要 求 , 最 好 用 禁 食 的 标 本 以 减 少 乳 糜 血 的 干 扰 。离 心 后 采 集 血 清 或 血 浆 。血 清 4℃ 可 贮 6 天 ,在 20~ 25 ℃ 也可保存 6 天。

3.试 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 北 京 利 德 曼 白 蛋 白 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下





含 PH=4.2



琥珀酸缓冲液 溴甲酚绿 表面活性剂及稳定剂
3.2 仪 器 及 参 数 :

0.25mmol/L <0.1%

3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 副波长 反应温度 6300nm 700nm 37℃ 分析方法 反应方向 S : R 终点法 向上 3: 300

4. 质 量 控 制 : 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 , 3S 为 失 控 限 , 绘 制 质 控 图 , 判 断 是 否在控(质控规则见生化室室内质控操作规程) 在控后方可进行标 。 本测定,若失控,查明原因并采取措施。

5 计算方法:

样本白蛋白含量=

〓C0

△At----------标本管的吸光度变化;

△As----------标准管的吸光度变化; C0-----------标准液的浓度; 6. 参 考 值 范 围 : 4~ 14 岁 儿 童 , 血 清 白 蛋 白 浓 度 为 38~ 54g/L, 健 康 成 人 血 清 白 蛋 白 浓 度 为 34~ 48g/L。 7. 临 床 意 义 :血 清 白 蛋 白 在 肝 脏 合 成 。 清 白 蛋 白 浓 度 增 高 常 见 于 严 血 重 失 水 、血 浆 浓 缩 所 致 ,并 非 蛋 白 质 绝 对 量 的 增 加 。临 床 上 尚 未 发 现 单 纯 白 蛋 白 浓 度 增 高 的 疾 病 , 而 以 白 蛋 白 浓 度 降 低 为 多 见 .白 蛋 白 浓 度降低的原因与总蛋白浓度降低的原因相同乙但有时总蛋白的浓度 接近正常,而白蛋白的浓度降低,同时又伴有球蛋白浓度的增高。

急性白蛋白浓度降低主要由于急性大量出血或严重烫伤时血浆 大量丢失。慢性白蛋白浓度降低主要由于肝脏合成白蛋白功能障碍、 腹水形成时白蛋白的丢失和肾病时尿液中的丢失, 重时白蛋白浓度 严 可 低 于 10g/L。 白 蛋 白 浓 度 低 于 25g/L 时 , 由 于 胶 体 渗 透 压 的 下 降 , 常可见到水肿等现象。 妊 娠 ,尤 其 是 妊 娠 晚 期 ,由 于 体 内 对 蛋 白 质 的 需 要 量 增 加 ,同 时 又 伴 有 血 浆 容 量 增 高 ,血 清 白 蛋 白 可 明 显 下 降 ,但 分 娩 后 可 迅 速 恢 复 正 常 。文 献 报 道 ,还 有 极 少 数 先 天 性 白 蛋 白 缺 乏 症 病 例 ,由 于 白 蛋 白 合成障碍,血清中几乎没有白蛋白,但患者不出现浮肿。 8.附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 : 胆 红 素 ≤ 40mg/dl, 血 红 蛋 白 ≤ 500mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl,乳 糜 < 1.60%时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 60g/L, 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 1:1 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘 以 2。 ⑶危急值报告:无危急值。 ⑷ 注 意 事 项 :① 该 试 剂 除 与 白 蛋 白 反 应 外 , 还 可 以 与 血 清 中 许 多 蛋 白 如 铜 兰 蛋 白 、 C 反 应 蛋 白 、 а -球 蛋 白 、 结 合 珠 蛋 白 也 可 呈 色 , 呈 慢 反 应 ,实 际 上 当 血 清 与 试 剂 混 合 之 后 就 开 始 反 应 ,持 续 一 个 小 时 之 后 反 应 完 成 , 故 在 反 应 最 初 的 30 秒 之 内 读 取 吸 光 度 , 可 减 少 非 特 异 性 反 应 。 ② 当 60g/L 白 蛋 白 标 准 与 BCG 结 合 后 .溶 液 光 径 1.0cm , 在 630nm 测 定 的 吸 光 度 应 为 0.811〒0.035. 如 达 不 到 此 值 , 表 示 灵

敏 度 较 低 。③ 此 法 测 定 正 常 血 清 标 本 的 批 间 变 异 系 数 为 6.3%左 右 。④ 国 内 试 剂 大 多 为 溴 甲 酚 绿 法 , 些 进 口 原 装 试 剂 则 用 的 溴 甲 酚 紫 (BCP) 有 方法, BCP 法 的 优 点 是 受 球 蛋 白 和 其 他 血 浆 蛋 白 干 扰 较 小 , 和 BCG 但 法 相 比 ,灵 敏 度 较 低 。此 外 ,溴 甲 酚 紫 与 非 人 源 性 白 蛋 白 结 合 力 相 当 弱, 适用于测定动物标本中的白蛋白, 质控血清往往是动物血清, 不 而 故 其 应 用 不 如 BCG 法 普 遍 。 ⑸ 血 清 球 蛋 白 含 量 及 白 球 比 值 :在 临 床 生 化 检 验 中 ,一 般 不 需 要 单 独 测 定 球 蛋 白 的 含 量 ,而 是 在 测 定 总 蛋 白 和 白 蛋 白 含 量 之 后 ,用 总 蛋 白 减去白蛋白的含量即为球蛋白的含量。 前全自动生化分析仪能同时 目 测 定 白 蛋 白 和 总 蛋 白 的 含 量 , 并 计 算 出 白 球 比 值 , A/G 比 值 的 参 考 范 围 为 1.5~ 2.5.球 蛋 白 浓 度 增 高 。临 床 上 常 以 ? 球 蛋 白 增 高 为 主 .球 蛋 白 增 高 的 原 因 , 除 水 分 丢 失 的 间 接 原 因 外 , 主 要 有 下 列 因 素 :① 感 染 性 疾 病 :如 结 核 病 、痢 疾 、黑 热 病 、血 吸 虫 病 、麻 风 病 等 ;② 自 身 免 疫 性 疾 病 :如 系 统 性 红 斑 猥 疮 、 硬 皮 病 、 风 湿 热 、 类 风 湿 性 关 节 炎 、 肝 硬 化 等 ;③ 多 发 性 骨 髓 瘤 :球 蛋 白 可 增 至 20~ 50 g/L 。 球蛋白浓度降低主要是合成减少. 正常婴儿出生后至 3 岁内, 由 于 肝 脏 租 免 疫 系 统 尚 未 发 育 完 全 ,球 蛋 白 浓 度 较 低 ,此 属 于 生 理 性 低球蛋白血症。 上腺皮质激素和其他免疫抑制剂有抑制免疫机能的 肾 作 用 , 会 导 致 球 蛋 白 的 合 成 减 少 .低 ? 球 蛋 白 血 症 或 无 ? 球 蛋 白 血 症 , 患者血清中 ? 蛋白极度下降或缺如。先天性患者,仅见于男性婴儿, 而 后 天 获 得 性 的 .可 发 生 于 男 、女 两 性 。此 类 患 者 缺 乏 体 液 免 疫 功 能 , 很易发生难以控制的感染.

9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 军 事 医 学 出 版 社 , 2006

郧县中医院检验科 主题内容

生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-03 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 9页 共 103 页

血清总 胆 红 素 (TBIL)测 定

血 清 总 胆 红 素 (TBIL)测 定 (钒 酸 盐 氧 化 法 )
1.实 验 原 理 : 总 胆 红 素 (是 血 红 蛋 白 、 肌 红 蛋 白 、 过 氧 化 物 酶 、 细 胞 色素等含铁卟琳的化合物在体内代谢的产物。血清中有两类胆红素, 即未结合胆红素和合胆红素。 结合胆红素又称游离胆红素或间接胆 未 红 素 。间 接 胆 红 素 在 生 理 pH 条 件 下 是 难 溶 于 水 的 脂 溶 性 物 质 ,可 透 过 细 胞 膜 ,对 细 胞 有 毒 害 作 用 ,不 能 通 肾 脏 随 尿 排 出 体 外 。结 合 胆 红 素即胆红素葡萄糖醛酸酯, 称直接胆红素, 接胆红素是水溶性的, 又 直 不 易 透 过 细 胞 膜 ,可 通 过 肾 脏 随 尿 排 出 。总 胆 红 素 是 直 接 胆 红 素 与 间 接胆红素的和。釩酸盐氧化法原理如下: 釩酸盐 总胆红素 胆绿素

胆 红 素 的 减 少 引 起 在 波 长 450nm 处 吸 光 度 下 降 ,吸 光 度 的 变 化 与总胆红素含量成正比。

2.标 本 采 集 : 采 用 空 腹 无 溶 血 血 清 , 要 尽 快 分 离 测 定 。 2 -8℃ 避 光 保 存 ,血 清 中 胆 红 素 可 稳 定 3 天 。冰 冻 保 存 3 个 月 ,胆 红 素 水 平 未 见 明 显变化。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 北 极 利 德 曼 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下 成 份 含 量

R1:柠 檬 酸 缓 冲 液 反应促进剂 表面活性剂 R2:磷 酸 盐 缓 冲 液 偏钒酸钠

100mmol/L 1mmol/L 2mmol/L 10mmol/L 4mmol/L 2 仪 3.

器及参数: 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 副波长 反应温度 450nm 546nm 37℃ 分析方法 反应方向 S:R1:R2 终点法 向下 14:280:70

4. 质 量 控 制 : 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 , 3S 为 失 控 限 , 绘 制 质 控 图 , 判 断 是 否在控(质控规则见生化室室内质控操作规程) 在控后方可进行标 。 本测定,若失控,查明原因并采取措施。

5. 计 算 方 法 : 血 清 胆 红 素 的 含 量 ( μ mol/L)= △At----------标本管的吸光度变化; △As----------标准管的吸光度变化; C0-----------标准液的浓度; 6. 参 考 值 范 围 : 婴

〓C0

儿 : 出 生 24 小 时 内 < 150μ mol/L 出生第 2 天 出生第 3 天 出 生 第 4~ 6 天 22-193μ mol/L 12-217μ mol/L 1.7-216μ mol/L 3.4-17μ mol/L



童: >一个月

成 年 人 : 3.4-17.2μ mol/L 7.临 床 意 义 ⑴ 判 断 有 无 黄 疸 、 黄 疸 程 度 及 演 变 变 过 程 : 当 STB> 17.1 μ mol/L 但 <34.2μ mol/L 时 为 隐 性 黄 疸 或 亚 临 床 黄 疸 ;34.2-171μ mol/L 为 轻度黄疸, 171-342μ mol/L 为 中 度 黄 疸 , >342μ mol/L 时 为 重 度 黄 疸 。 在病程中检测可以判断疗效和指导治疗。 ⑵ 根 据 黄 疸 程 度 推 断 黄 疸 病 因 溶 血 性 黄 疸 通 常 <85.5μ mol/L , 细 肝 胞 黄 疸 为 17.1-171μ mol/L , 不 完 全 性 梗 阻 性 黄 疸 为 171 - 265μ mol/L , 完 全 性 梗 阻 性 黄 疸 通 常 >342μ mol/L 。 ⑶ 根据总胆红素、结合及非结合胆红素增高程度判断黄疸类型若 STB 增 高 伴 非 结 合 胆 红 素 明 显 增 高 提 示 为 溶 血 性 黄 疸 ,总 胆 红 素 增 高 伴结合胆红素明显升高为胆汁淤积性黄疸, 者均增高为肝细胞性黄 三 疸。

8.附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 : 血 红 蛋 白 ≤ 100mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl, 乳 糜 < 1.60%时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 680μ mol/L, 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 倍 比 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果乘以稀释倍数。 ⑶ 危 急 值 报 告 :当 新 生 儿 血 清 标 本 测 定 结 果 总 胆 红 素 〉340μ mol/L 时,在经过复查等确认手段处理后应及时向临床主管医生汇报。 ⑷ 注 意 事 项 : ① 当 采 用 100 μ mol/L 的 浓 度 标 准 液 时 , 吸 光 度 的 变 化 范 围 在 0.05~ 0.20 ②试 剂 空 白 吸 光 度 应 < 0.10, 否 则 应 视 为 过 期 不 能 在 使 用 。③ 本 法 测 定 血 清 胆 红 素 ,在 10~ 37℃ 条 件 下 不 受 温 度 的 变 化 影 响 ,呈 色 在 2 小 时 内 非 常 的 稳 定 。胆 红 素 对 光 敏 感 ,标 准 及 标 本 均 应 尽 量 避 光 。 ④ 钒 酸 盐 法 试 剂 稳 定 、保 存 期 长 ,可 室 温 保 存 ,操 作 简 单 , 特 别 适 合 全 自 动 生 化 分 析 仪 。 ⑤ 1993 年 日 本 学 者 对 该 法 , 目 前 国 内 用 户 众 多 ,文 献 均 认 为 该 法 和 传 统 方 法( 改 良 J-G 法 )有 良 好 的相关性。线性和特异性达到较理想的水平。 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 军 事 医 学 出 版 社 , 2006

郧县中医院检验科 主题内容

生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-03 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 13 页 共 103 页

血清直 接 胆 红 素 (TBIL)测 定

血 清 直 接 胆 红 素 ( D-BIL) 测 定 (钒 酸 盐 法 )
1.实 验 原 理 : 在 正 常 生 理 状 态 下 , 间 接 胆 红 素 以 胆 红 素 -血 浆 蛋 白 复 合 物 的 形 式 经 血 液 运 输 ,这 一 方 面 增 大 了 胆 红 素 的 水 溶 性 ,有 利 于 运 输 ;同 时 又 使 血 红 素 固 定 在 大 分 子 蛋 白 质 上 , 可 阻 止 血 红 素 进 入 细 胞

内 ,避 免 了 胆 红 素 对 细 胞 的 毒 害 作 用 。但 是 如 果 血 液 中 间 接 胆 红 素 浓 度过高, 血浆清蛋白浓度明显降低时, 导致间接胆红素游离增多, 或 可 从 而 增 加 了 间 接 胆 红 素 透 人 细 胞 内 的 危 险 .另 外 , 些 阴 离 子 对 清 蛋 某 白 与 胆 红 素 的 结 合 具 有 竞 争 作 用 。如 游 离 脂 肪 酸 、甲 状 腺 素 、磺 胶 类 药 物 、水 杨 酸 等 在 血 浆 中 的 推 度 升 高 时 ,都 可 使 间 接 胆 红 素 和 血 浆 蛋 白 质 的 结 合 减 少 。间 接 血 红 素 进 入 肝 细 胞 后 ,与 肝 细 胞 内 的 载 体 蛋 白 Y 或 z 结 合 形 成 血 红 素 -y 或 胆 红 素 -z , 以 此 形 式 运 往 滑 面 内 并 质 网 ,在 葡 萄 糖 醛 酸 基 转 移 酶 作 用 下 ,胆 红 素 与 二 磷 酸 尿 苷 葡 萄 糖 醛 酸 反 应 生 成 结 合 胆 红 素 ,即 直 接 胆 红 素 。直 接 胆 红 素 再 经 肝 内 胆 道 系 统 和 胆 总 管 随 胆 汁 一 起 排 入 肠 道 进 一 步 代 谢 ,最 后 以 胆 素 形 式 ,随 尿 及粪便排出体外。 在 PH 值 为 3.0左 右 、 表 面 活 性 剂 和 间 接 胆 红 素 抑 制 剂 的 条 件 下 , 样品中的直接胆红素被氧化剂釩酸盐氧化为胆绿素。 红素的黄色特 胆 异 性 吸 光 度 下 降 ,通 过 测 定 釩 酸 盐 氧 化 前 后 吸 光 度 的 变 化 ,计 算 出 样 品中直接胆红素的含量。 胆红素 钒酸盐 胆绿素 2.标 本 采 集 及 保 存 : 采 用 空 腹 无 溶 血 血 清 , 要 尽 快 分 离 测 定 。 2 -8℃ 避 光 保 存 ,血 清 中 胆 红 素 可 稳 定 3 天 。冰 冻 保 存 3 个 月 ,胆 红 素 水 平 未见明显变化。
3 .实 验 试 剂 :

3.1 试 剂 : 使 用 北 极 利 德 曼 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下 成 份 含 量

R1:柠 檬 酸 缓 冲 液 反应促进剂 表面活性剂 R2:磷 酸 盐 缓 冲 液 偏钒酸钠

100mmol/L 1mmol/L 2mmol/L 10mmol/L 4mmol/L

3.2 仪 器 及 参 数 : 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 副波长 反应温度 450nm 546nm 37℃ 分析方法 反应方向 S:R1:R2 终点法 向下 14:280:70

4. 质 量 控 制 : 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 , 3S 为 失 控 限 , 绘 制 质 控 图 , 判 断 是 否在控(质控规则见生化室室内质控操作规程) 在控后方可进行标 。 本测定,若失控,查明原因并采取措施。

5. 计 算 方 法 : 血 清 胆 红 素 的 含 量 ( μ mol/L)= △At----------标本管的吸光度变化; △As----------标准管的吸光度变化; C0-----------标准液的浓度;

〓C0

6. 参 考 值 范 围 : < 6.8μ mol/L 7. 临 床 意 义 : 根 据 直 接 胆 红 素 与 总 胆 红 素 比 值 , 有 助 于 鉴 别 黄 疸 类 型 , 如 DBIl/TBIL < 20% 提 示 为 溶 血 性 黄 疸 , 20% -50% 常 为 肝 细 胞 性 黄 疸 ,比 值 >50% 为 梗 阻 性 黄 疸 。直 接 胆 红 素 测 定 可 能 有 助 于 某 些 肝 胆 疾 病 的 早 期 诊 断 。肝 炎 的 黄 疸 前 期 、无 黄 疸 型 肝 炎 、失 代 偿 期 肝 硬 化 、 肝 癌 等 , 30% -50% 患 者 表 现 为 直 接 胆 红 素 增 加 , 而 总 胆 红 素 正常(见下表)

正常人及常见黄疸的胆红素素代谢检查结果 血清胆红素 尿内胆色素

DBIL

TBIL

D/T

尿胆红素

尿胆原

正常人

0~ 6.8

3.4~ 17.1

0.2~ 0.4

阴性

0.84~ 4.2

梗阻性黄疸

明显增加

轻度增加

>0.5

强阳性

减少或缺少

溶血性黄疸

轻度增加

明显增加

<0.2

阴性

明显增加

肝细胞性黄疸 中度增加

中度增加

0.2~ 0.5

阳性

正常或轻度增加

8.附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 : 血 红 蛋 白 ≤ 300mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 20mg/dl, 乳 糜 < 0.40%时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 430μ mol/L, 如 样 品 测 定 值 超

过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 倍 比 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果乘以稀释倍数。 ⑶危急值报告:无。 ⑷ 注 意 事 项 : ① 当 采 用 100 μ mol/L 的 浓 度 标 准 液 时 , 吸 光 度 的 变 化 范 围 在 0.07~ 0.20 ②试 剂 空 白 吸 光 度 应 < 0.10, 否 则 应 视 为 过 期 不 能 在 使 用 。③ 本 法 测 定 血 清 胆 红 素 ,在 10~ 37℃ 条 件 下 不 受 温 度 的 变 化 影 响 ,呈 色 在 2 小 时 内 非 常 的 稳 定 。胆 红 素 对 光 敏 感 ,标 准 及 标 本 均应尽量避光。④ 釩酸盐法试剂稳定、保存期长,可室温保存,操 作 简 单 , 特 别 适 合 全 自 动 生 化 分 析 仪 。 ⑤ 1993 年 日 本 学 者 对 该 法 , 目 前 国 内 用 户 众 多 ,文 献 均 认 为 该 法 和 传 统 方 法( 改 良 J-G 法 )有 良 好 的 相 关 性 。线 性 和 特 异 性 达 到 较 理 想 的 水 平 。⑥ 直 接 胆 红 素 包 括 结 合 胆 红 素 和 胆 红 素 δ -胆 红 素 , 而 间 接 胆 红 素 则 是 游 离 胆 红 素 。 因 此 在 加 速 剂 存 在 的 情 况 下 ,所 有 部 分 的 胆 红 素 都 参 与 反 应 ,其 测 定 结 果 为总胆红素。总胆红素健减去直接胆红素即为间接胆红素。 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 军 事 医 学 出 版 社 , 2006

郧县中医院检验科 主题内容

生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-04 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 17 页 共 103 页

血清丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 测 定

血 清 丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 测 定 (IFCC 推 荐 方 法 )
1.实 验 原 理 : 丙 氨 酸 氨 基 转 移 酶 (ALT) 又 称 谷 丙 转 氨 酶 (GPT) , 它 催 化 L- 丙 氨 酸 和 L- 谷 氨 酸 之 间 氨 基 的 转 移 , 在 此 过 程 中 相 应 的 酮 酸 是 a -酮 戊 二 酸 和 丙 酮 酸 。 丙 酮 酸 进 入 柠 檬 酸 循 环 被 利 用 , 而 谷 氨 酸 产 生 的 氨 为 尿 素 循 环 提 供 氮 源 。 在 正 常 情 况 下 , ALT 主 要 存 在 于 各 组 织 细 胞 中 (以 肝 细 胞 中 含 量 最 多 , 心 肌 细 胞 中 含 量 也 较 多 ) , 只 有 极 少 量 释 放 人 血 液 中 ,所 以 血 清 中 此 酶 活 力 很 低 ,当 这 些 组 织 病 变,细胞坏死或通透性增加时,细胞内的酶即可大量释放人血液中, 使 血 清 中 该 酶 的 活 力 显 著 增 高 。 在 ALT 速 率 法 中 , 谷 丙 转 氨 酶 催 化 L-丙 氨 酸 的 氨 基 转 移 ,生 成 丙 酮 酸 。丙 酮 酸 与 NADH 在 LDH 的 催 化 下 反 应 生 成 乳 酸 和 NAD + 。 NADH 在 340nm 处 有 特 异 吸 收 峰 , 其 被 氧 化 的 速 率 与 血 清 中 ALT 的 活 性 成 正 比 ,在 340nm 处 测 定 NADH 下 降 速 率 , 即 可 测 出 ALT 活 性 单 位 。

ALT L-丙 氨 酸 + α -酮 戊 二 酸 丙 酮 酸 + L-谷 氨 酸

NADH + 丙 酮 酸 + H +

LDH

L-乳 酸 + NAD + + H 2 O

2.标 本 采 集 与 处 理 :宜 采 用 血 清 标 本 。草 酸 盐 、肝 素 、枸 橼 酸 盐 虽 不 抑 制 酶 活 性 ,但 可 引 起 反 应 液 轻 度 浑 浊 。红 细 胞 内 ALT 含 量 为 血 清 中 3~ 5倍 ,故 应 避 免 标 本 溶 血 。血 清 臵 4℃ 冰 箱 内 1周 ,酶 活 性 无 显 著 变 化 。 不 推 荐 冰 冻 保 存 ALT 测 定 标 本 。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 北 京 利 德 曼 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下 成 份 含 PH=7.8 量 80mmol/L

R1:Tris 缓 冲 液 L-丙 氨 酸 LDH R2:起 动 液 NADH

200mmol/L
>1.2U/ml

0.18mmol/L 12mmol/L

a -酮 戊 二 酸
3.2仪 器 及 参 数 :

3.2.1使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 , 具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 340nm 分析方法 速率法 延滞时间 60S

副波长 反应温度

410nm 37℃

反应方向 S:R1:R2

向下 20:200: 40

读数时间 理论因子

120S 2090

4. 质 量 控 制 : 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 , 3S 为 失 控 限 , 绘 制 质 控 图 , 判 断 是 否在控(质控规则见生化室室内质控操作规程) 在控后方可进行标 。 本测定,若失控,查明原因并采取措施。 5.计 算 方 法 : ALT(U/L) =
ΔA/min×Vt×1000

= ΔA/min×F

式中: ΔA/min 一一每分钟吸光度变化率; e 一一 6.22 摩尔吸光系数; Vt 一一反应液总体积 (ml); Vs 一一样品体积 (ml); d 一一 比色杯光径 (cm) F 一一 理论因子 6. 参 考 值 范 围 : 不 含 磷 酸 吡 哆 醛 女 性 <31U/L 男 性 <41U/L 7.临 床 意 义 : ( 1) 急 性 病 毒 性 肝 炎 ALT 异 常 , 阳 性 率 为 80% -100%, 是 病 毒 性 肝 炎 的 重 要 检 查 指 标 。 急 性 乙 型 肝 炎 ALT 升 高 显 著 , 若 较 高 的 水 平 持 续 数 月 ,甚 至 于 数 年 ,表 明 转 为 慢 性 。重 症 肝 炎 和 亚 急 性 肝 炎 时 , 一 度 上 升 的 ALT 在 症 状 恶 化 时 有 酶 活 性 降 低 , 出 现 血 清 胆 红 素 和 ALT 变 化 分 离 的 现 象 , 可 能 是 肝 坏 死 的 征 兆 。 含磷酸吡哆醛 10~ 35U/L 10~ 50U/L

( 2)慢 性 肝 炎 、肝 硬 化 ALT 轻 度 上 升 或 正 常 ,血 清 AST〉ALT。 当 慢 性 肝 炎 、 肝 硬 化 患 者 ALT 正 常 而 甲 胎 蛋 白 升 高 时 , 要 警 惕 并 发原发性肝癌的可能。 ( 3)其 他 原 因 致 肝 功 能 损 害 心 功 能 不 全 致 肝 淤 血 ,可 有 ALT 升 高 .当 心 功 能 好 转 时 , ALT 周 恢 复 正 常 :脂 肪 肝 、 胆 管 炎 、 药 物 性 肝 脏 损 害 等 ALT 将 升 高 。 8. 附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 :当 标 本 中 胆 红 素 ≤ 40mg/dl,血 红 蛋 白 ≤ 100mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl,乳 糜 <1.6%时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 600U/L , 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 1:1 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘 以 2。 ⑶危急值报告:无危急值。 ⑷ 注 意 事 项 : ① 正 常 新 生 儿 ALT 水 平 比 成 年 人 约 高 2 倍 ,出 生 后 约 3 个 月 降 至 成 年 人 的 水 平 .新 生 儿 ,尤 其 未 成 熟 儿 , 细 胞 膜 通 透 性 肝 较 大 ,ALT 从 肝 细 胞 渗 入 血 浆 较 多 ,使 血 清 ALT 水 平 升 高 .② 如 果 试 剂 空 白 吸 光 度 下 降 至 1.0,表 明 NADH 己 下 降 50%左 右 , 不 能 保 证 ALT 测 定 的 线 性 范 围 。 试 剂 盒 贮 存 到 有 效 期 末 时 ,必 须 做 试 剂 空 白 吸 光 度 测 定 .若 试 剂 空 白 吸 光 度 小 于 1.0 时 ,应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 .③ ALT 测 定 中 存 在 两 个 副 反 应 ; a:血 清 中 存 在 的 α - 酮 酸 (如 丙 酮 酸 )能 消 耗 NADH; 丙 酮 酸 + NADH + H +
LDH

乳 酸 + NAD +

b:血 清 中 谷 氨 酸 脱 氢 酶 (GLDH) 增 高 时 , 在 有 氨 存 在 的 条 件 下 , 亦 能 消 耗 NADH。 α - 酮 戊 二 酸 + NADH + H + +NH4 +
GLDH

L- 谷 氨 酸 + NAD + + H 2 O

上 述 副 反 应 都 能 消 耗 NADH , 使 340 nm 处 吸 光 度 下 降 值 增 加 , 使测定结果偏高。目前,推荐 双试剂法,因孵育期长,能有效地消 除 于 扰 反 应 , 提 高 测 定 准 确 性 , 是 ALT 测 定 的 首 选 方 法 。 双 试 剂 法 可 适 当 地 降 低 试 剂 中 LDH 的 用 量 。至 于 NH4 + 的 于 扰 ,除 严 重 肝 病 时 血 清 谷 氨 酸 脱 氢 酶 活 性 增 高 和 血 氨 增 高 时 外 , 一 般 血 清 中 NH4 + 的 含 量 甚 徽 , 干 扰 反 应 不 大 。 LDH 原 试 剂 往 往 是 用 饱 和 硫 酸 铵 配 制 的 , 此 但 厂方在使用前必须经过严格的脱氨处理。 ④ IFCC 推 荐 的 试 剂 盒 中 , 含 有 磷 酸 吡 哆 醛 (P-5'-P), 这 是 转 氨 酶 的 辅 基 ,能 使 血 清 中 ALT 显 示 最 大 活 性 。有 文 献 报 道 ,某 些 病 理 状 态 下 ,血 清 中 存 在 脱 辅 基 的 ALT 酶 蛋 白 ,当 使 用 含 P-5'-P 的 底 物 时 可 使 血 清 ALT 活 性 提 高 7% ~ 55%" 变 化 幅 度 的 大 小 与 血 清 中 原 有 P - 5' - P 含 量 有 关 , 健 康 人 血 清 中 P-5'-P 含 量 适 中 , 底 物 中 P-5'- P 对 增 高 ALT 活 性 作 用 不 大 。但 肾 脏 病 患 者 血 清 P -5' -P 水 平 偏 低 ,底 物 中 P-5'-P 可 显 著 升 高 血 清 ALT 活 性 。 ALT 测 定 中 有 的 用 磷 酸 盐 缓 冲 液 , 有 的 用 Tris 缓 冲 液 。 据 报 道 :① NADH 在 Tris 缓 冲 液 中 稳 定 性 较 高 ;② P -5'-P 在 Tris 缓 冲 液 中 , 显 示 出 更 有 效 的 激 活 作 用 ,而 磷 酸 盐 缓 冲 液 有 延 缓 P-5'-P 与 脱 辅 基 酶 蛋 白 的 结 合 作用。 9.参 考 文 献 :

9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006。 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 军 事 医 学 出 版 社 , 2006。

郧县中医院检验科

生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-06 版本/修订号:1/0

主题内容 血清天 门 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶 测 定

生效日期:2011-5-20 第 22 页 共 103 页

血 清 天 门 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶 测 定 (IFCC 推 荐 方 法 )
1.实 验 原 理 :天 门 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶 (AST)又 叫 谷 草 转 氨 酶 (GOT),它 催 化 氨 基 从 特 定 的 氨 基 酸 (L-谷 氨 酸 或 L-天 门 冬 氨 酸 )转 移 到 相 应 的 酮 (α -酮 戊 二 酸 和 草 酰 乙 酸 。在 体 内 反 应 是 反 向 进 行 ,以 提 供 尿 素 循 环 的 氨 源 。 生 成 的 谷 氨 酸 在 谷 氨 酸 脱 氢 酶 作 用 下 脱 氨 , α -酮 戊 二 酸 再 生 , 生 成 的 氨 可 进 入 鸟 氨 酸 循 环 。 在 正 常 情 况 下 , AST 存 在 于 各 种 组 织 细 胞 中 ,心 、肝 、骨 髓 和 肾 含 有 相 似 的 AST 量 ,因 此 酶 的 释 放 不 是 特 异 的 , 但 酶 的 释 放 说 明 有 组 织 损 害 。 谷 草 转 氨 酶 催 化 L-天 门 冬 氨 酸 的 氨 基 转 移 与 MDH 催 化 的 反 应 偶 联 ,使 NADH 氧 化 成 NAD + 。NADH 在 340nm 处 有 特 异 吸 收 峰 ,其 被 氧 化 的 速 率 与 血 清 中 AST 的 活 性 成 正 比 , 在 340nm 处 测 定 NADH 下 降 速 率 ,即 可 测 出 AST 活 性 单 位 。 L- 天 门 冬 氨 酸 + α - 酮 戊 二 酸 谷氨酸 NADH + 草 酰 乙 酸 + H+ MDH L-苹 果 酸 + NAD + AST 草 酰 乙 酸 + L-

+ H2O 2.标 本 采 集 与 处 理 :3 天 内 的 活 性 损 失 :2~ 8℃ 保 存 :<8%;15~ 25℃ 保 存 : <10%; 标 本 稳 定 性 : -20℃ 保 存 至 少 可 稳 定 3 个 月 。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 北 京 利 德 曼 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下





含 80mmol/L 200mmol/L
>1.2U/ml >0.8U/ml



R1:Tris 缓 冲 液 L-天 门 冬 氨 酸 LDH MDH R2: NADH

0.18mmol/L 12mmol/L 3. 2

a -酮 戊 二 酸

仪器及参数: 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 :

主波长 副波长 反应温度

340nm 410nm 37℃

分析方法 反应方向 S:R1:R2

速率法 向下 20:200: 40

延滞时间 读数时间 理论因子

60S 120S 2090

4. 质 量 控 制 : 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 , 3S 为 失 控 限 , 绘 制 质 控 图 , 判 断 是 否在控(质控规则见生化室室内质控操作规程) 在控后方可进行标 。 本测定,若失控,查明原因并采取措施。
5.计 算 方 法 : AST(U/L)

=

ΔA/min×Vt×1000

=ΔA/min×F

式中: ΔA/min 一一每分钟吸光度变化率; e 一一 6.22 摩尔吸光系数;

Vt 一一反应液总体积 (ml); Vs 一一样品体积 (ml); d 一一 比色杯光径 (cm) F 一一 理论因子 6. 参 考 值 范 围 : 不含磷酸吡哆醛 女 性 <31U/L 男 性 <41U/L 7 临床意义: 天门冬氨酸氨基转移酶存在于各种组织细胞内, 以心肌含量最 尤 为 丰 富 , 其 活 性 强 度 的 顺 序 大 致 为 心 脏 >肝 脏 >肌 肉 >肾 , 所 以 AST 升 高 常 见 于 急 性 肝 炎 、药 物 性 肝 坏 死 、肝 癌 、肝 硬 化 、慢 性 肝 炎 和 心 肌 炎 等 ;胸 膜 炎 、肾 炎 及 肺 炎 等 含 量 轻 度 升 高 ;心 肌 梗 塞 时 AST 明 显 升 高;骨骼肌疾病如进行性肌营养不良,皮肌炎和挤压性肌肉损伤等 AST 可 升 高 。 8. 附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 :当 标 本 中 胆 红 素 ≤ 40mg/dl,血 红 蛋 白 ≤ 100mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl,乳 糜 <1.6%时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 600U/L , 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 1:1 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘 以 2。 ⑶危急值报告:无危急值。 ⑷ 注 意 事 项 : ①本 法 的 缺 点 是 标 本 AST 活 性 高 时 , 酰 乙 酸 对 AST 草 含磷酸吡哆醛 10 ~ 40U/L 10 ~ 50U/L

显 示 反 馈 抑 制 ,使 测 定 结 果 偏 低 。酮 血 症 中 乙 酰 乙 酸 及 。② 其 它 的 注 意 事 项 与 ALT 检 测 相 同 。 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 军 事 医 学 出 版 社 , 2006

郧县中医院检验科 主题内容

生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-07 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 25 页 共 103 页

血清碱性磷酸酶测定

血清碱性磷酸酶测定
1.实验原理:碱 性 磷 酸 酶 (ALP)几 乎 存 在 于 机 体 的 各 个 组 织 , 但 以 骨 髓 与 牙 齿 、 肾 脏 和 肝 脏 中 含 量 较 多 。 正 常 人 血 清 中 的 ALP 主 要 来 自 骨 髓 ,由 成 骨 细 胞 产 生 ,故 骨 髓 疾 患 ,特 别 是 当 有 新 骨 质 生 成 时 和 正 在 生 长 的 儿 童 期 ,血 液 内 ALP 活 力 增 高 。又 因 为 该 酶 由 肝 脏 排 泄 ,且 有 部分来自肝脏,故肝胆疾病,特别是胆道 阻塞时此酶在血中活力增 高 。 磷 酸 对 硝 基 苯 酚 P-NPP) 底 物 , 以 ( 为 2-氨 基 -2-甲 基 -1-丙 醇 AMP) ( 为 磷 酰 基 的 受 体 物 质 , 增 进 酶 促 反 应 速 率 。 P-NPP 在 碱 性 溶 液 中 为 无 色 , 在 ALP 催 化 下 , P-NPP 分 裂 出 磷 酸 基 团 , 生 成 游 离 的 对 硝 基 苯 酚 ( P-NP) 后 者 在 碱 性 溶 液 中 转 变 成 醌 式 结 构 , 呈 现 较 深 的 黄 色 。 在 , 波 长 405nm 处 监 测 吸 光 度 增 高 速 率 ,计 算 出 ALP 活 性 。

ALP 对硝基苯磷酸二钠 + +H 3 PO 4 2.标 本 采 集 与 处 理 :无 特 殊 要 求 ,最 好 用 禁 食 的 标 本 以 减 少 乳 糜 血 的 干 扰 。 离 心 后 采 集 血 清 或 肝 素 抗 凝 的 血 浆 。 但 草 酸 、 柠 檬 酸 和 EDTA 能 抑 制 ALP 活 性 , 故 不 能 用 这 些 物 质 作 抗 凝 剂 。 血 清 臵 常 温 ( 25℃ ) ALP 活 性 显 示 轻 度 升 高 , 臵 冰 箱 ( 4℃ ) 酶 活 性 也 会 缓 慢 升 高 。 冰 冻 血 清 中 ALP 活 性 下 降 , 当 血 清 复 溶 后 , 酶 活 性 会 慢 慢 恢 复 。 H2O 对硝基苯酚

3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 东 欧 津 玛 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下

成 R1: Mgcl 2 AMP



含 ≧1.0mmol/L ≧100mmol/L ≧16mmol/L



R2:对 硝 基 苯 磷 酸 盐 3.2 仪 器 及 参 数 :

3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 :

主波长 副波长 反应温度

405nm 520nm 37℃

分析方法 反应方向 S:R1:R2

速率法 向上 5:200:50

延滞时间 读数时间 理论因子

60S 150S 2757

4. 质 量 控 制 : 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 , 3S 为 失 控 限 , 绘 制 质 控 图 , 判 断 是 否在控(质控规则见生化室室内质控操作规程) 在控后方可进行标 。 本测定,若失控,查明原因并采取措施。 5.计算方法: ALP(U/L) =
ΔA/min×Vt×1000

=ΔA/min× F

式中: ΔA/min 一一每分钟吸光度变化率; e 一一 6.22 摩尔吸光系数; Vt 一一反应液总体积 (ml); Vs 一一样品体积 (ml); d 一一 比色杯光径 (cm) F 一一 理论因子

6 参考区间

37℃ , 女 性 : 1- 12 岁 >12 岁 37℃ , 男 性 : 1- 12 岁 12- 15 岁 >25 岁 <750U/L 50- 136U/L

<500U/L 50- 136U/L <500U/L

7.临床意义: ⑴ 肝 胆 系 统 疾 病 :各 种 肝 内 、肝 外 胆 管 阻 塞 疾 病 ,如 胰 头 癌 ,胆 道 道 结 石 引 起 的 胆 管 阻 塞 、 原 发 性 胆 汁 性 肝 硬 化 、 肝 内 胆 汁 淤 积 等 , ALP 明 显 升 高 ,且 与 血 清 胆 红 素 升 高 相 平 行 ;累 积 肝 实 质 细 胞 的 肝 胆 疾 病 如 肝 硬 化 、 肝 炎 , ALP 轻 度 升 高 。

⑵ 黄 疸 的 鉴 别 诊 断 : ALP 和 血 清 胆 红 素 、 转 氨 酶 同 时 测 定 助 于 黄 疸 鉴 别诊断 ① 胆 汁 淤 积 性 黄 疸 , ALP 和 血 清 胆 红 素 明 显 升 高 , 转 氨 酶 度 增 高 。 ② 肝 细 胞 性 黄 疸 ,血 清 胆 红 素 中 度 增 加 ,转 氨 酶 活 性 很 高 ,ALP 正 常 或稍高。 ③ 肝 内 局 限 性 胆 道 阻 塞 如 原 发 性 肝 癌 、 转 移 性 肝 癌 、 肝 脓 肿 等 ALP 明 显 增 高 , ALT 无 明 显 增 高 , 胆 红 素 大 多 正 常 。 ⑶ 骨 骼 疾 病 :如 纤 维 性 骨 炎 、佝 偻 病 、骨 软 化 症 、成 骨 肉 瘤 及 骨 折 愈 合 期 , ALP 升 高 。 ⑷ 生 长 中 儿 童 、 妊 娠 中 晚 期 血 清 ALP 生 理 性 增 高 。 8.附 注 : ⑴ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 500U/L , 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘 以 稀释倍数。 ⑵危急值报告:无危急值。 ⑶ 注 意 事 项 : ① 血 清 臵 室 温 25℃ ),ALP 活 性 显 示 轻 度 升 高 .例 如 ( 室 温 臵 6 小 时 ,酶 活 性 约 增 高 1%,臵 1— 4 天 ,酶 活 性 亦 出 现 缓 慢 地 升 高 .冰 冻 血 清 ,ALP 活 性 降 低 ,但 当 血 清 复 温 后 ,酶 活 性 会 慢 慢 恢 复 .质 控 血 清 或 冻 干 质 控 血 清 亦 呈 现 类 似 的 ALP 活 性 升 高 现 象 。 ② 如 果 试 剂 空 白 吸 光 度 > 1.0,应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 . ③ ALP 活 性 与 血 清 在 反 应 液 中 所 占 体 积 分 数 有 关 .已 发 现 当 血 清 体 积 分 数 从 1/26 减 低 到 1/51 时 ,测 出 的 酶 活 性 随 之 增 高 ;但 低 于 1/51 时 ,酶 活 性 没 有

进 一 步 增 加 。这 一 效 应 的 原 因 还 不 清 楚 ,可 能 是 因 为 在 较 高 稀 释 度 下 ALP 多 聚 体 解 聚 所 致 。 ④ ALP 能 水 解 多 种 天 然 存 在 的 或 合 成 的 有 机 磷 酸 酯 。在 体 内 , ALP 的 真 正 底 物 尚 不 清 楚 。ALP 先 天 缺 陷 的 个 体 ,尿 中 大 量 排 出 磷 酸 乙 醇 胺 ,推 测 它 可 能 是 一 种 真 正 的 生 理 性 底 物 。⑤ 在 大 多 数 ALP 测 定 方 法 中 , 释 放 出 的 磷 酸 醛 基 转 移 给 水 分 子 , 此 时 ALP 的 酶 促 反 应 属 水 解 类 反 应 。 使 用 某 些 氨 基 醇 缓 冲 液 时 , ALP 的 催 化 速 率 增 强 。 常 用 于 ALP 测 定 的 缓 冲 液 可 归 类 3 种 :惰 性 型 , 如 碳 酸 缓 冲 液 ;抑 制 型 ,如 甘 氨 酸 缓 冲 液 ;激 活 型 ,如 AMP、Tris 和 DEA 等 缓 冲 液 。 激 活 型 缓 冲 液 , 缓 冲 物 质 作 为 酶 的 一 种 底 物 (磷 酸 酰 基 的 受 体 ) 参 与 磷 酸 酸 基 的 移 换 反 应 ,因 此 能 增 进 酶 促 反 应 速 率 。使 用 最 适 浓 度 的 激 活 型 缓 冲 液 时 , 所 测 的 ALP 活 性 要 比 使 用 惰 性 型 缓 冲 液 (如 碳 酸 盐 缓 冲 液 )时 高 2-6 倍 DEA 的 激 活 作 用 比 AMP 的 激 活 作 用 更 强 。 此 , 因 用 不 同 缓 冲 液 测 定 ALP 活 性 时 ,其 参 考 值 不 同 。目 前 多 数 试 剂 盒 选 择 AMP 作 为 缓 冲 液 。 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 军 事 医 学 出 版 社 , 2006.

郧县中医院检验科

生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-08

版本/修订号:1/0 主题内容

血清γ-谷氨酰转酞酶测定

生效日期:2011-5-20 第 29 页 共 103 页

血清γ-谷氨酰转酞酶测定
1实验原理 γ- 谷氨酸转移酶 (γ - GT) 是一种肤转移酶,它能催化谷胱甘肽 或其他含谷氨酸基多肽上的谷氨酸基团 再转移到其他合适受体。血清中γ - GT 主要来自肝脏, 因此各种肝胆系统疾病可引起血清中 γ-GT 活力的增高。 最适 pH 因底物缓冲液种类而异。 甘氨酰甘氨酸(双甘肤)作为酶 反应的受体,可加速 反应的进行。 连续监测法 (L-γ-谷氨酰- 3-羟基-对硝基苯胺为底物)。 γ谷氨酰- 3-羟基-对硝基苯胺和双甘肽在γ- 谷氨酰转肽酶作用下,谷氨酰转移 到双甘肽分子上,同时释放出黄色的2-硝基-5 -氨基苯甲酸,其与γ-谷氨酰转 肤酶活力成正比,通过在 405 nm 处测定 2-硝基-5 -氨基苯甲酸吸光度增高的 速率的变化,可求出γ-谷氨酸转肽酶活力。 γ - 谷 氨 酰 -3-羧 基 -4-硝 基 苯 胺 +甘 氨 酰 甘 氨 酸 氨酰甘氨酰甘氨酸 + 5-氨 基 -2-硝 基 苯 甲 酸 。 γ -GT γ -谷

生 成 的 5-氨 基 -2-硝 基 苯 甲 酸 在 405nm 波 长 处 有 吸 收 峰 , 形 成 其 的 速 率 与 血 清 中 γ -GT 活 性 成 正 比 ,故 通 过 测 定 吸 光 度 增 加 的 速 率 即 可 测 出 γ -GT 的 活 性 。 2.标 本 采 集 与 处 理 : 样 品 为 血 清 或 经 肝 素 抗 凝 的 血 浆 .溶 血 或 长 时 间 未 分 离 血 细 胞 不 影 响 γ -GT 的 测 定 . 血 清 中 γ -GT 的 活 力 , 室 温 下 或 4℃ 稳 定 7 天 ,在 冷 冻 状 态 下 可 稳 定 2 个 月 。

3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 温 州 东 瓯 津 玛 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下






≧100mmol/L ≧100mmol/L ≧4mmol/L



R1:Tris 缓 冲 液 双甘肽 R2:γ -谷 氨 酰 -3-羧 基 -4-硝 基 苯 胺 3.2 仪 器 及 参 数 :

3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 :

主波长 副波长 反应温度

405nm 520nm 37℃

分析方法 反应方向 S:R1:R2

速率法 向上 20:200: 50

延滞时间 读数时间 理论因子

60S 150S 1423

4. 质 量 控 制 : 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 , 3S 为 失 控 限 , 绘 制 质 控 图 , 判 断是否在控(质控规则见生化室室内质控操作规程) 在控后方 。 可进行标本测定,若失控,查明原因并采取措施。 5.计算方法:ALP(U/L) =
ΔA/min×Vt×1000

=ΔA/min×F

式中: ΔA/min 一一每分钟吸光度变化率; e 一一 6.22 摩尔吸光系数; Vt 一一反应液总体积 (ml);

Vs 一一样品体积 (ml); d 一一 比色杯光径 (cm) F 一一 理论因子 6 参考区间: 男 性 : 11-50 U/L(37℃ ) 女 性 : 7 -32 U/L(37℃ ) 7.临 床 意 义 : γ -GT 对 各 种 肝 胆 疾 病 均 有 临 床 应 用 价 值 , 多 由 肝 胆 疾 病均可引起升高,但升高程度不尽相同。 ⑴ 原 发 性 或 转 移 性 肝 癌 : γ -GT 显 著 升 高 , 且 其 活 性 与 肿 瘤 大 小 及病情严重程度呈平行关系。 ⑵ 阻 塞 性 黄 疸 : 肝 内 外 胆 道 阻 塞 时 , γ -GT 排 泄 受 阻 易 随 胆 汁 返 流 入 血 , 使 血 中 γ -GT 明 显 升 高 , 其 升 高 程 度 比 肝 癌 更 明 显 , 且 与 血 清 胆 红 素 ALP 相 一 致 。 ⑶病毒性肝炎及肝硬化: 炎时坏死区邻近的肝细胞内此酶合成 肝 亢 进 , 引 起 血 清 γ -GT 升 高 , 但 上 升 幅 度 明 显 低 于 ALT, 但 在 肝 炎 恢 复 期 , γ -GT 为 唯 一 的 仍 然 升 高 的 酶 , 提 示 尚 未 完 全 痊 愈 , 若 长 期 升 高,有肝坏死倾向。 ⑷ 嗜 酒 者 和 酒 精 性 肝 炎 : 嗜 酒 者 γ -GT 可 升 高 ; 酒 精 性 肝 炎 硬 化 和 肝 炎 γ -GT 也 会 上 升 。 8.附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 :苯 巴 比 妥 、苯 妥 英 、戊 巴 比 妥 、二 氯 安 替 比 林 、安 替 比 林 等 能 引 起 GGT 的 升 高 , 大 量 饮 酒 的 人 GGT 也 升 高 。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 300U/L , 如 样 品 测 定 倍 数 值

超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘以稀释。 ⑶危急值报告:无危急值。 ⑷注意事项: ①柠檬酸盐、草酸盐和氟化物抗凝剂含抑制酶活 10%— 15%故 不 宜 用 这 些 抗 凝 剂 。 如 果 试 剂 空 白 吸 光 度 > 1.0,则 应 视 ② 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 .③ 甘 氨 酸 对 GGT 反 应 有 抑 制 作 用 , 用 的 肝 所 胺 肽 制 剂 中 不 应 有 甘 氨 酸 。 ④ γ -谷 氨 酰 -3-羧 基 -4-硝 基 苯 胺 由 于 分 子 具 有 羟 基 ,因 而 溶 解 度 较 前 述 底 物 为 大 ,容 易 配 制 底 物 溶 液 ,又 没 有 明 显 的 自 然 水 解 , 所 测 得 的 GGT 活 力 段 较 高 。 因 此 , 该 底 物 在 临 床 检 验 中 已 被 推 广 应 用 。 由 于 酶 动 力 学 的 复 杂 性 , 同 时 有 几 个 "最 适 方 法 "被 推 荐 是 不 足 为 奇 的 。 根 据 计 算 机 进 行 "应 答 面 方 法 学 "处 理 , 在下列范围内的测定条件,均能得到较大的 GGT 活 力 : pH

7.8-8.5 , 双 甘 肽 100- 250 mmol/L , γ -谷 氨 酰 -3-羧 基 -4-硝 基 苯 胺 6.6-10.2mmoVL,Tris -HCl 缓 冲 液 100mmol/L , 应 液 中 血 清 与 试 反 剂 的 体 积 比 例 为 1:10.用 含 羟 基 底 物 所 测 的 参 考 值 ,要 比 用 不 含 羟 基 底 物 所 测 的 参 考 值 高 许 多 。为 了 两 者 所 测 结 果 相 近 ,便 于 比 较 ,有 些 试剂盒中有意降低含羟基底物的浓度。 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 军 事 医 学 出 版 社 , 2006

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文件编号:检验科-SH-09 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 33 页 共 103 页

血清尿素测定

血清尿素测定
1.实验原理:尿 素 (urea) 是 体 内 氨 基 酸 分 解 代 谢 的 最 终 产 物 之 一 , 氨 基 酸 经 脱 氨 基 作 用 生 成 氨 ,与 糖 代 谢 产 生 的 二 氧 化 碳 ,在 肝 脏 经 鸟 氨 酸 循 环 而 合 成 尿 素 ,血 中 尿 素 的 来 源 是 肝 脏 ,而 去 路 主 要 是 通 过 肾 脏随尿排出体外。所以测定血中尿素量可粗略估计肾小球滤过功能。 尿 素 在 脲 酶 催 化 下 水 解 生 成 氨 和 二 氧 化 碳 ,氨 在 γ -酮 戊 二 酸 和 还 原 型 辅 酶 I 存 在 下 , 经 谷 氨 酸 脱 氢 酶 催 化 生 成 谷 氨 酶 ,同 时 还 原 型 辅 酶 I 被 氧 化 成 氧 化 型 辅 酶 I, 还 原 型 辅 酶 I 在 340nm 有 吸 收 , 其 吸

光度下降速率与待测样品中尿素含量成正比。 尿素 HCO 3 - NH 4 + + α - 酮 戊 二 酸 +NADH GLDH L- 谷 氨 酸 + NAD + + 2H 2 O 脲酶 2 NH 4 + + 2

+ H2O 2 标本采集与处理: 样 品 为 血 清 或 经 肝 素 抗 凝 的 血 浆 . 血 清 、 血 浆 室 温 下 最 多 1 天 ; 4~ 8℃ 冷 藏 最 多 5 天 ; -18℃ 冷 冻 保 存 可 长 达 6 个 月 . 3.实验试剂及仪器: 3.1 试 剂 : 使 用 四 川 迈 克 尿 素 氮 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下 成 а -酮 戊 二 酸 二磷酸核苷 谷氨酸脱氢酶 R2:烟 胺 腺 嘌 呤 二 核 苷 酸 脲酶 份 含 量

R1:Tris 缓 冲 液

120 mmol/L 7.0 mmol/L 0.6 mmol/L ≥ 1KU/L 0.25 mmol/L ≥ 6KU/L

3.2 仪 器 及 参 数 : 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 :

主波长 副波长

340nm 405nm

分析方法 反应方向

速率法 向下

延滞时间 读数时间

60S 120S

反应温度

37℃

S:R1:R2

3:240: 60

4. 质量控制:在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ) .在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 ,若 失 控 , 查 明 原 因 并 采 取 措 施 。

5.计 算 方 法 : 样 本 中 尿 素 的 含 量 (Urea)=

〓C 0

△ At----------标 本 管 的 吸 光 度 变 化 ; △ As----------标 准 管 的 吸 光 度 变 化 C 0 ----------- 标 准 液 的 浓 度 ; Δ A==A2--A1; 6 参考区间: 血 清 或 血 浆 : 1.8~ 7.1 mmol/L

7. 临床意义:,尿 素 浓 度 受 多 种 因 素 影 响 ,分 为 生 理 性 因 素 和 病 理 性 因 素两个方面: A.生 理 性 因 素 :高 蛋 白 饮 食 可 引 起 血 清 尿 素 浓 度 开 高 , 男 性 比 女 性 平 均 高 0.3-0.5mmol/L , 随 着 年 龄 的 增 长 有 升 高 的 倾 向 . B.病 理 性 因 素 : (1)肾 前 性 :最 重 要 的 原 因 是 失 水 ,引 起 血 液 浓 缩 , 肾 血 流 量 减 少 , 肾 小 球 滤 过 率 降 低 而 使 尿 素 潴 留 .见 于 剧 烈 呕 吐 、 幽 门 梗阻、肠梗阻和长期腹泻、肝肾综合征等。 (2)肾 性 :急 性 肾 小 球 肾 炎 、慢 性 肾 炎 、慢 性 肾 孟 肾 炎 、肾 病 晚 期 、肾 功 能 衰 竭 及 中 毒 性 肾 炎 等 .但 血 尿 素 测 定 不 能 作 为 肾 脏 疾 病 早 期 检 查 指 标 ,但 对 慢 性 肾 衰 ,尤 其 尿 毒 症 , 其 增 高 的 程 度 与 病 情 严 重 程 度 一

致。 ⑶ 肾 后 性 :见 于 尿 路 梗 阻 ,如 尿 路 结 石 、肿 瘤 、前 列 腺 肿 瘤 和 肥 大 等 。 ⑷ 蛋 白 质 分 解 或 摄 入 过 多 :如 急 性 传 染 病 、 高 热 、 上 消 化 道 大 出 血 、 大 面 积 烧 伤 、严 重 创 伤 、大 手 术 后 和 甲 状 腺 功 能 亢 进 、高 蛋 白 饮 食 等 , 但血肌酐一般不升高。 血尿素减少较为少见,常表示严重的肝病,如肝炎合并广泛肝坏死。 8.附 注 : (1)干 扰 因 素 : ① 在 测 定 过 程 中 , 各 种 器 材 和 蒸 溜 水 应 无 氨 离 子 污 染 ,否 则 结 果 偏 高 。② 血 氨 升 高 可 使 尿 素 测 定 结 果 偏 高 ,溶 血 标本对测定有正干扰。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 35 mmol/L, 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 1:1 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘 以 2。 ⑶ 危 急 值 报 告 : Urea>36 μ mol/L 。 ⑷ 注 意 事 项 : 如 果 试 剂 空 白 吸 光 度 < 1.0 或 变 浑 浊 ,应 视 为 过 期 试 剂 , 不能再使用. 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006.

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文件编号:检验科-SH-10 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20

血清肌酐测定

第 36 页

共 103 页

血清肌酐测定(碱性苦味酸法)
1.实验原理:肌 酐 由 外 源 性 和 内 源 性 两 类 组 成 。 内 源 性 肌 酐 的 生 成 量 是 相 当 恒 定 的 ,每 天 每 20g 肌 肉 约 代 谢 产 生 1g 肌 酐 。血 液 中 的 肌 酐 主 要 由 肾 小 球 滤 过 排 出 体 外 ,肾 小 管 很 少 分 泌 也 基 本 上 不 吸 收 , 故 通 常 忽 略 不 计 。 所 以 , 在 外 源 性 肌 酐 稳 定 的 情 况 下 ,血 液 中 肌 酐 浓 度 可 以 作 为 检 测 肾 小 球 滤 过 功 能 的 指 标 之 一 。当 肾 实 质 损 害 ,肾 小 球 滤 过 率 降 低 到 肾 小 球 滤 过 率 (GFR) 的 临 界 点 后 (GFR 下 降 至 正 常 人 的 1/3 时 ), 血 肌 酐 浓 度 就 会 明 显 上 升 , 故 测 定 血 肌 酐 浓 度 可 作 为 GFR 受 损 的 指 标 。敏 感 性 较 尿 素 好 ,但 并 非 早 期 诊 断 指 标 。肌 酐 的 化 学 速 率 法 测定是根据肌酐与苦味酸反应, 成橘红色的苦味酸肌酐复合物的拟 生 一 级 反 应 动 力 学 。在 碱 性 反 应 环 境 中 ,样 品 中 的 肌 酐 或 干 扰 物 质 和 苦 味酸的反应速度不同,选择适宜 的速率监测时间,可以提高肌酐测 定的特异性。 肌酐+苦味酸
NaOH

苦味酸肌酐复合物

2.标本采集与处理: 样 品 为 血 清 或 经 肝 素 抗 凝 的 血 浆 . 血 清 、 血 浆 室 温 下 最 多 5 天 ; 冷 藏 最 多 30 天 ; 冷 冻 保 存 可 超 过 30 天 。 3.实验试剂及仪器: 成 份 含 量

R1:NaoH 硼砂 R2:苦 味 酸

0.30 mmol/L 0.10 mmol/L 49.0 mmol/L

3.1 试 剂 : 使 用 四 川 迈 克 肌 酐 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下 3.2 仪 器 及 参 数 : 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 :

主波长 副波长 反应温度

505nm 600nm 37℃

分析方法 反应方向 S:R1:R2

两点法 向上 100:500:5 00

延滞时间 读数时间

20S 60S

4. 质量控制:在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ) .在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 ,若 失 控 , 查 明 原 因 并 采 取 措 施 。

5.计算方法:样 本 中 肌 酐 的 含 量 CREA=

〓C 0

△ At----------标 本 管 的 吸 光 度 变 化 ; △ As----------标 准 管 的 吸 光 度 变 化 ; C 0 ----------- 标 准 液 的 浓 度 ;

Δ A=A2-A1 6 参考区间: 血 清 或 血 浆 : 44.0~ 133.0μ mmol/L (男 性 ) 70.0~ 106.0μ mmol/L ( 女 性 ) 7. 临床意义: (1)反 应 GFR 减 退 的 后 期 指 标 ,当 肾 小 球 GFR 功 能 减 退 减 少 至 50%时 , Scr 仍 可 正 常 ,患 者 Ccr 降 至 正 常 水 平 的 1/3 时 ,Scr 有 明 显 上 升 ,且 上 升 曲 线 斜 率 明 会 陡 然 变 大 , 此 阶 段 Scr 是 氮 质 血 症 病 情 观 察 和 疗 在 效判断的有效指证。 (2)Scr 日 内 生 理 波 动 在 10%内 ,但 与 个 体 肌 肉 量 有 关 。肌 肉 发 达 者 与 消 瘦 者 Scr 生 理 浓 度 有 明 显 的 差 异 。 娠 期 间 因 生 理 原 因 GFR 可 升 高 , 妊 但 肌 酐 生 成 生 产 速 率 不 变 , Scr 因 血 浆 稀 释 .作 用 而 比 正 常 人 低 , 据 调 查 多 在 35.2~ 52.8μ mmol/L.如 果 孕 妇 Scr>70.4μ mmol/L,应 视 为 升高倾向。 ( 3) 在 正 常 的 肾 血 流 量 下 , 肌 酐 如 果 升 高 至 176~ 353μ mmol/L, 提 示 为 中 度 至 严 重 的 肾 损 害 。 所以血肌酐对晚期的肾脏疾病临床意义比较大。 尿 素 与 肌 酐 同 时 测 定 更 有 意 义 ,如 果 两 者 同 时 升 高 ,说 明 肾 脏 有 严 重 的损害。 8.附 注 : (1)干 扰 因 素 :干 扰 肌 酐 测 定 的 物 质 如 血 中 的 丙 酮 酸 、叶 酸 、葡 萄 糖 、 乙酰乙酸等都能在此反应中呈色, 血清作样品测定时此类物质可占 用 发 色 强 度 的 20%, 此 外 一 些 头 孢 类 药 物 也 可 产 生 正 干 扰 。 根 据 苦 味 酸

法发展的出来的动力学方法, 于肌酐和非肌酐色原在反应速度上的 基 差异来避开非特异的干扰。 据干扰物质和苦味酸反应的快慢可以将 根 非 肌 酐 色 原 物 质 分 为 有 两 类 :一 类 为 快 速 反 应 假 肌 酐 物 质 ,在 与 碱 性 苦 味 酸 混 合 后 20 秒 内 出 现 反 应 。测 定 时 设 臵 20 秒 延 迟 期 ,可 以 减 少 干 扰 。 另 一 类 为 慢 反 应 假 肌 酐 物 质 , 在 与 碱 性 苦 味 酸 混 合 后 80~ 100 秒 才 开 始 反 应 。 这 样 在 20~ 80 秒 出 现 窗 口 期 , 此 时 肌 酐 与 苦 味 酸 的 呈 色 占 主 导 的 地 位 。 有 研 究 发 现 窗 口 期 的 上 限 为 60 秒 。 为 了 提 高 速 率 法 的 特 异 性 , 速 率 法 测 定 时 间 选 择 在 25~ 60 秒 期 间 。 1980 年 对 速 率法进行严格的评价后指出, 率法仍受到 a 酮酸的正干扰和胆红素 速 的负干扰。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 的 线 性 范 围 可 达 800μ mol/L , 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 进 行 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果乘以稀释的倍数。 ⑶ 危 急 值 报 告 : Crea>36 μ mol/L。 ⑷ 注 意 事 项 : 如 果 试 剂 空 白 吸 光 度 >0.200 或 变 浑 浊 , 应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 . 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006.

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文件编号:检验科-SH-11 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 40 页 共 103 页

血清尿酸测定

血清尿酸测定(尿酸酶-过氧化物酶偶联法)

1 实验原理:尿 酸 是 核 酸 中 嘌 呤 分 解 代 谢 的 最 终 产 物 ,其 中 大 部 分 经 肾 小 球 滤 过 排 出 ,在 肾 小 管 近 段 全 部 被 重 吸 收 。人 体 血 中 的 尿 酸 量 与 体 内的核酸的分解代谢速度、肾脏的排泄功能和食物中的核酸量有关。 正 常 成 年 人 血 中 的 尿 酸 含 量 为 2~ 6mg/dL , 如 果 嘌 呤 代 谢 紊 乱 , 血 中 的 尿 酸 含 量 超 过 时 ,尿 酸 以 钠 盐 的 形 式 沉 淀 在 关 节 周 围 、软 骨 及 皮 下 ,造 成 关 节 剧 烈 疼 痛 和 皮 下 结 节 ,临 床 上 称 为 通 风 。正 常 人 每 日 尿 液 排 泄 尿 酸 约 210mg/24h, 如 含 量 增 高 可 在 泌 尿 道 沉 淀 而 形 成 结 石 。 尿 酸 酶 氧 化 尿 酸 生 成 尿 囊 素 和 过 氧 化 氢 ,在 过 氧 化 物 酶 催 化 下 ,过 氧 化 氢 使 3, 5-二 氯 二 羟 苯 磺 酸 和 4-氨 基 安 替 比 林 缩 合 成 红 色 醌 类 化 合 物 。 生 成 的 醌 亚 胺 在 520 nm 波长有最大吸收,所产生的颜色强度

与血清中尿酸含量成正比,再通过与同样处理的尿酸标准溶液比较, 经过计算可求出血清中尿酸的含量。 尿酸+O2+2H2O
NaOH

尿囊素+CO2+2H20 2H20+4-氨基安替代比林+2,4,6--三碘-3-羟基苯甲酸
GOD

醌亚胺+H2O

2.标本采集与处理:样 品 为 血 清 或 经 肝 素 抗 凝 的 血 浆 .血 清 、血 浆 在 2~ 8℃ 可 稳 定 3 天 ,在 冰 冻 状 态 下 可 稳 定 6 个 月 . 3.实验试剂及仪器: 3.1 试 剂 : 使 用 四 川 迈 克 尿 酸 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下 成 份 含 ≥ 2KU/L 量

R1:4-氨 基 安 替 比 林 过氧化物酶

≥ 1mmol/L

抗坏血酸氧化酶 R2:尿 酸 酶 ESPAS 3.2 仪 器 及 参 数 :

≥ 1KU/L ≥ 0.5KU/L ≥ 0.5mmol/L

3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 :

主波长 副波长 反应温度

546nm 660nm 37℃

分析方法 反应方向 S:R1:R2

终点法 向上 8:225:75

4. 质量控制:在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ) .在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 ,若 失 控 , 查 明 原 因 并 采 取 措 施 。 5.计算方法:样 本 中 尿 酸 的 含 量 UA= 〓C 0

△ At----------标 本 管 的 吸 光 度 ; △ As----------标 准 管 的 吸 光 度 ; C 0 ----------- 标 准 液 的 浓 度 ; Δ A==A2 -- A1 6 参考区间: 149~ 416μ mmol/L (男 性 ) 89~ 357μ mmol/L ( 女 性 )

7. 临床意义: (1)血 清 尿 酸 测 定 对 痛 风 诊 断 最 有 帮 助 , 痛 风 患 者 血 清 中 尿 酸 增 高 , 但有时亦会出现正常尿酸值。 (2)在 核 酸 代 谢 增 加 时 , 如 白 血 病 、 多 发 性 骨 髓 瘤 、 真 性 红 细 胞 增 多 症等,血清尿酸值常升高。 (3)在 肾 功 能 减 退 时 , 常 伴 有 血 清 尿 酸 增 加 。 (4)在 氯 仿 中 毒 、 四 氯 化 碳 中 毒 及 铅 中 毒 、 子 痫 、 妊 娠 反 应 及 食 用 富 含核酸的食物等,均可引起尿酸增高。 8.附 注 : (1)干 扰 因 素 : ① 遇 到 高 浓 度 的 维 生 素 C 的 标 本 时 , 可 使 测 定 结 果 偏 低 ,故 不 少 试 剂 盒 中 加 入 抗 环 血 酸 氧 化 酶 ,防 止 维 生 素 C 的 干 扰 。② 尿 酸 的 反 应 偶 联 了 Trinder 反 应 ,能 够 干 扰 其 反 应 的 物 质 ,同 样 使 尿 酸测定受到影响。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 的 线 性 范 围 可 达 1190μ mol/L, 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 进 行 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果乘以稀释的倍数。 ⑶危急值报告: 。 ⑷ 注 意 事 项 : 如 果 试 剂 在 526nm 波 长 下 空 白 吸 光 度 应 < 0.300 或 变 浑 浊 ,应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 . 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006.

9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006.

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文件编号:检验科-SH-12 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 43 页 共 103 页

葡萄糖测定

葡萄糖测定(氧化酶法)
1.实验原理:糖 是 人 体 的 供 能 物 质 。 食 物 中 可 消 化 的 糖 类 主 要 是 淀 粉 (还 有 蔗 糖 、 乳 糖 、 葡 萄 糖 、 果 糖 、 麦 芽 糖 等 ) , 在 肠 道 消 化 为 单 糖 吸 收 后 经 门 静 脉 人 肝 , 后 以 葡 萄 糖 (glucose)的 形 式 经 体 循 环 运 到 然 各 组 织 器 官 ,被 细 胞 摄 取 ,以 氧 化 供 能 或 转 为 其 他 物 质 。人 体 内 主 要 的 糖 类 是 糖 原 及 葡 萄 糖 。糖 原 是 人 体 内 糖 类 的 贮 存 形 式 ,葡 萄 糖 是 糖 类的运输形式,显然血糖指人体内血液中的葡萄糖。每个个 体全天 血糖含量随进食、活动、兴奋等情况,时有波动,一般在空腹 时血 糖 较 为 恒 定 ,这 是 由 于 血 糖 的 来 源 和 去 路 保 持 动 态 平 衡 ,所 以 空 腹 血 糖的浓度能够反映糖的代谢水平,一旦糖代谢紊乱,血糖的 来源和 去路失去平衡,表现为高血糖症或低血糖症。 血糖浓度的恒定有重 要 的 生 理 意 义 。如 脑 组 织 和 血 细 胞 没 有 糖 原 储 存 ,必 须 不 断 摄 取 血 液 中 的 葡 萄 糖 来 获 取 能 量 ,若 大 脑 不 能 从 血 液 获 得 葡 萄 糖 ,则 发 生 低 血 糖 昏 迷 。血 糖 浓 度 主 要 通 过 器 官 、激 素 及 神 经 来 调 节 。肝 脏 是 调 节 血 糖 浓 度 最 主 要 的 器 官 ,是 通 过 糖 原 合 成 、糖 的 异 生 和 糖 原 分 解 来 调 节

的 ;肾 脏 则 靠 肾 小 管 细 胞 对 原 尿 中 的 葡 萄 糖 重 吸 收 能 力 的 大 小 来 调 节 血 糖 浓 度 。参 与 调 节 血 糖 的 激 素 主 要 有 胰 岛 素 、肾 上 腺 素 、胰 高 血 糖 素 、肾 上 腺 皮 质 激 素 、 生 长 激 素 和 甲 状 腺 素 。除 胰 岛 素 是 降 低 血 糖 外 ,其 他 激 素 均 使 血 糖 升 高 。在 正 常 情 况 下 ,通 过 中 枢 神 经 系 统 的 调 节 ,这 两 类 激 素 相 互 对 抗 ,相 互 制 约 ,使 血 糖 的 补 充 与 消 耗 维 持 动 态 平衡,从而使血糖浓度恒定在一定的范围。
1.

在葡萄糖氧化酶的作用下,葡萄糖氧化生成过氧化氢和葡萄糖

酸 。过 氧 化 氢 在 过 氧 化 酶 的 存 在 下 与 苯 酚 、4-氨 基 安 替 比 林 氧 化 缩 合 成 红 色 的 醌 类 化 合 物 。 此 物 质 在 505nm 处 有 最 大 的 吸 收 峰 , 其 吸 光 度 值与葡萄糖含量成正比。 Β-D-葡萄糖 + O2 + 2H2O
GOD

D-葡萄糖酸 + H202

H20 + 4-氨基安替代比林

+

苯酚

POD

醌亚胺

+

H2O

2.标本采集与处理:测 定 标 本 以 草 酸 钾 -氟 化 钠 抗 凝 剂 为 好 ,如 果 标 本 为 血清应尽快将血清与血细胞分离, 免因红细胞仍以无氧酵解分解葡 以 萄糖而致结果偏低。 3.实验试剂及仪器: 3.1 试 剂 : 使 用 温 州 东 瓯 津 玛 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下

成 R1:苯

份 酚

含 ≥ 2KU/L ≥ 1KU/L ≥ 15KU/L



≥ 10mmol/L

过氧化物酶 抗坏血酸氧化酶 R2:葡 萄 糖 氧 化 酶 4-氨 基 安 替 比 林

≥ 0.5mmol/L

3.2 仪 器 及 参 数 : 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 副波长 反应温度 505nm 660nm 37℃ 分析方法 反应方向 S:R1:R2 终点法 向上 3:225:75

4. 质量控制:在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ) .在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 ,若 失 控 , 查 明 原 因 并 采 取 措 施 。

5.计算方法:样 本 中 葡 萄 糖 的 含 量 GLU=

〓C 0

△ At----------标 本 管 的 吸 光 度 ; △ As----------标 准 管 的 吸 光 度 ; C 0 ----------- 标 准 液 的 浓 度 ; Δ A==A2--A1. 6 参考区间: 3.89~ 6.1mmol/L

7

临床意义:

血糖浓度调节受神经系统和激素的调节而保持相对稳

定 ,当 这 些 调 节 失 去 原 有 的 相 对 平 衡 时 ,则 出 现 高 血 糖 或 低 血 糖 。空 腹 血 糖 低 于 3.3 mmol/L 时 为 低 血 糖 症 ;超 过 7.0mmol/L 时 ,可 考 虑 诊断糖尿病 。

( 1) 生 理 性 高 血 糖 : 见 于 餐 后 1 -2 小 时 ,摄 入 高 糖 食 物 后 ,或 情 绪 紧张肾上腺分泌增加时。 ( 2) 病 理 性 高 血 糖 : ①内分泌腺功能障碍能引起高血糖,如胰腺细跑损害导致胰岛素分 泌 缺 乏 ,血 糖 可 超 过 正 常 ,临 床 上 称 为 糖 尿 病 。其 他 内 分 泌 疾 病 引 起 的各种对抗胰岛素的激素分泌过多也会出现高血糖。 ② 颅 内 压 增 高 剌 激 血 糖 中 枢 ,如 颅 外 伤 、精 内 出 血 、脑 膜 炎 等 .可 使 血糖升高。 ③ 由 于 脱 水 引 起 的 高 血 糖 ,如 呕 吐 、腹 泻 和 高 热

等也可使血糖轻度增高。 ( 3) 生 理 性 低 血 糖 : 饥 饿 和 剧 烈 运 动 。 ( 4) 病 理 性 低 血 糖 : ①胰岛细胞增生或瘤等,使胰岛素分泌过多对该类病人应同时测定 血糖和膜岛素浓度。 ②对抗胰岛素的激素分泌不足,如垂体前叶机能减退、肾上腺皮质 功 能 减 退 和 甲 状 腺 功 能 减 退 而 使 生 长 激 素 、肾 上 腺 皮 质 激 素 、甲 状 腺 素分泌减少。 ③ 严 重 肝 病 患 者 , 于 肝 脏 储 存 糖 原 及 糖 异 生 等 功 能 低 下 .肝 脏 不 能 由 有效调节血糖。 ④ 药 源 性 低 血 糖 :药 物 是 低 血 糖 最 常 见 的 原 因 , 多 药 物 如 胰 岛 素 等 许 降糖药适量、普萘洛尔、水杨酸盐都可导致低血糖 。半寿期长的口 服降糖药在药源性低血糖中最常见。 ⑤ 胰 岛 素 自 身 抗 体 低 血 糖 :抗 胰 岛 素 抗 体 引 起 的 低 血 糖 可 见 于

Graves 病 、多 发 性 骨 髓 瘤 、系 统 性 红 斑 狼 疮 和 类 风 湿 性 关 节 炎 患 者 , 这类抗体不同于胰岛素治疗中产生的抗体和 1 型糖尿病人的自身抗 体, 导致低血糖的原因尚不清楚。 现为餐后高血糖和空腹低血糖。 其 表 实 验 室 测 定 有 低 C 肽 和 高 胰 岛 素 浓 度 。 (6) 无 症 状 低 血 糖 : 血 糖 <2.8 mmol/L 时 病 人 无 自 觉 症 状 , 可 发 生 于 非 糖 尿 病 患 者 和 50%的 长 期 糖 尿 病 患 者 。前 者 有 时 发 生 于 妊 娠 妇 女 ,机 制 与 胎 儿 从 母 体 不 断 摄 取 营 养 有 关 ,后 者 的 发 生 与 肾 上 腺 素 对 低 血 糖 的 反 应 降 低 有 关 ,特 别 是胰岛素强化治疗的 1 型糖尿病,要求血糖浓度控制接近正常。 8.附 注 : (1)干 扰 因 素 :① 内 源 性 干 扰 物 溶 血 为 1000mg/ml 、 脂 血 2000mg/ml、 黄 疸 30mg/ml、抗 坏 血 酸 80mg/ml 对 测 试 结 果 无 明 显 影 响 。但 过 氧 化 物酶的特异性要比葡萄糖氧化酶的特异性低得多, 些还原性物质如 一 尿 酸 、抗 坏 血 酸 、多 巴 胶 、胆 红 质 和 谷 脱 甘 肤 等 ,可 与 色 原 性 物 质 竞 争过氧化氢,产生竞争性抑制,使测定结果偏低。②在实际工作中, 特 别 是 住 院 病 人 ,血 糖 结 果 低 于 参 考 下 限 而 病 人 无 低 血 糖 表 现 ,可 能 的 原 因 是 :由 于 采 用 葡 萄 糖 氧 化 酶 法 (GOD -POD) 测 血 糖 时 受 维 生 素 C、多 巴 胺 等 药 物 影 响 。③ 本 试 剂 在 样 本 中 尿 酸 < 202mg/dl,肌 酐 < 196mg/d 时 测 定 无 明 显 干 扰 。 ⑵ 方 法 局 限 性 :本 试 剂 的 线 性 范 围 可 达 23mmol/L,如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 进 行 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘 以稀释的倍数。 ⑶ 危 急 值 报 告 : Glu<2.80mmol/L 或 >22.2mmol/L 。

⑷ 注 意 事 项 : ① 如 果 试 剂 在 500nm 波 长 下 空 白 吸 光 度 >0.300 或 变 浑 浊 ,应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 .② 标 本 采 集 不 合 格 所 致 。 在 临 床 工 作 中 ,由 于 真 空 采 血 管 的 应 用 ,离 心 后 通 过 一 层 凝 胶 股 使 血 清 与 血 细 胞 分 离 ,血 清 再 放 臵 血 糖 测 定 不 受 任 何 影 响 ,但 前 提 是 血 液 凝 固 后 必 须及时离心 。工作中会遇到标本由病房护士在夜间采集,第二天再 送 到 检 验 科 ,红 细 胞 消 耗 葡 萄 糖 所 致 。针 对 上 述 两 种 情 况 ,检 验 科 只 有建议重新采 集标本。 ③ 注意新生儿高血红素对该法有负干扰作用, 去胆红素 后可能较 除 准确地测定血糖。 ④ 住院病人血糖结果异常增高,应与临床联系,查询病人是否为糖 尿 病 人 ,与 其 尿 糖 是 否 相 符 ,一 旦 不 符 ,应 询 问 标 本 采 集 时 病 人 是 否 正在输葡萄糖,如果是则建议重新采集标本。 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006.

郧县中医院检验科 主题内容

生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-13 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 48 页 共 103 页

甘油三酯测定 甘油三酯测定(GPO--PAP 法)

1.实验原理:人 体 各 种 组 织 中 广 泛 分 布 着 甘 油 三 酯 , 而 占 全 身 98% 以 上 的 甘 油 。酯 则 是 贮 存 在 脂 肪 组 织 中 。甘 油 三 酯 的 主 要 生 理 功 能 是 氧 化 供 能 。机 体 在 利 用 甘 油 三 酯 时 ,首 先 将 其 水 解 成 甘 油 和 脂 肪 酸 ,然 后 再 分 别 将 它 们 氧 化 降 解 。 人 体 空 腹 时 所 需 能 量 的 50% -70% 是 由 脂 肪 酸 分 解 提 供 的 。人 体 内 的 甘 油 三 酯 除 来 自 食 物 之 外 ,还 靠 体 内 自 行 合 成 , 合 成 的 场 所 主 要 是 肝 脏 和 脂 肪 组 织 。

血清中甘油三酯的含量随年龄增长而有上升的趋势,尤其是体 重 超 过 标 准 的 中 年 以 上 的 人 往 往 偏 高 。进 食 脂 肪 后 ,血 清 中 甘 油 三 酯 上 升 , 可 出 现 浑 浊 , 示 乳 糜 微 粒 增 多 。 常 成 人 , 腹 时 按 1 g/kg 并 显 正 空 体 重 进 食 脂 肪 , 一 般 2 -4 小 时 内 血 清 甘 油 三 酯 达 最 高 峰 , 8 小 时 后 恢 复 正 常 ,脂 肪 清 除 作 用 差 的 人 ,清 除 时 间 延 长 。甘 油 三 酯 又 称 中 性脂肪或真脂,是全身各种脂肪的主要成分,参与体内能量的储存。 饮 食 对 血 中 甘 油 三 酯 的 影 响 很 大 。 因 此 , 采 血 化 验 时 至 少 应 空 10 -12 小 时 。 去 游 离 甘 油 的 GPO-PAP 法 第 一 反 应 :根 据 下 述 第 一 反 应 中 的 前 处 理 反 应 ,血 清 中 的 游 离 甘 油 被 消 除 ,第 一 反 应 中 若 有 LPL 或 胆 固 醇 酯 酶 混 入 后 ,标 本 中 的 甘 油 三 酯 被 分 解 成 游 离 甘 油 ,产 生 负 误 差 。本 试 剂 第 一 试 剂 能 抑 制 混 人 的

LPL 及 胆 固 醇 酯 酶 的 活 性 , 防 止 甘 油 三 酯 被 分 解 , 并 消 除 游 离 甘 油 。 反应式如下: TG + ATP
GK

甘油-3-磷酸 H2O2 +

+

ATP

甘油-3-磷酸 + O2 H202
过氧化氢酶

GPO

磷酸二羟丙酮

H2O + O2

第 二 反 应 :在 第 二 试 剂 中 的 LPL 及 LPL 活 性 化 成 分 的 作 用 下 ,血 清 中 甘 油 三 酯 迅 速 分 解 成 甘 油 及 脂 肪 酸 。 所 生 成 的 甘 油 在 ATP 存 在 下 , 通 过 甘 油 激 酶 (GK) 的 作 用 , 成 甘 油 -3 -磷 酸 , 者 又 在 甘 油 -3 生 后 -磷 酸 氧 化 酶 (GPO) 的 作 用 下 生 成 过 氧 化 氢 ,在 过 氧 化 物 酶 (POD) 存 在 下 , 过 氧 化 氢 使 4 -氨 基 安 替 匹 林 与 ESBmT 氧 化 缩 合 , 产 生 紫 红 色 色 素 。通 过 测 定 紫 红 色 色 素 的 吸 光 度 而 求 出 甘 油 三 酯 的 含 量 。抗 坏血酸的影响在酶前处理反应中被消除。反应式如下: TG + ATP
GK

甘油-3-磷酸
GPO

+

ATP

甘油-3-磷酸 + O2

H2O2
POD

+

磷酸二羟丙酮

H202 + 4-氨基安替代比林 + 氯酚

醌亚胺 + H2O

2.标本采集与处理:采 血 前 两 天 不 要 进 食 含 有 大 量 脂 肪 的 食 物 , 空 腹 至 少 8 小 时 以 上 , 采 集 静 脉 血 抗 凝 血 或 血 清 。 样 品 在 20~ 25℃ 保 存 可 稳 定 2 天 ; 4~ 8℃ 保 存 可 稳 定 1 周 ; -20℃ 保 存 至 少 可 稳 定 6 个 月 。 3.实验试剂及仪器: 3.1 试 剂 : 使 用 北 京 莱 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下









R1:磷 酸 盐 缓 冲 液 甘油激酶 甘油三磷酸氧化酶 脂蛋白脂肪酶 R2:4-氨 基 安 替 比 林 过氧化物酶 氯酚

PH=7.8 800U/L 4000U/L

50mmol/L

150000U/L 0.70mmol/L 440U/L 2mmol/L

3.2 仪 器 及 参 数 : 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 副波长 反应温度 546nm 660nm 37℃ 分析方法 反应方向 S:R1:R2 终点法 向上 3:260:130

4. 质量控制:在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ) .在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 ,若 失 控 , 查 明 原 因 并 采 取 措 施 。

5.计算方法:

样 本 中 TG 的 含 量 =

〓C0

△ At----------标 本 管 的 吸 光 度 变 化 ; △ As----------标 准 管 的 吸 光 度 变 化 ;

C0----------- 标 准 液 的 浓 度 ; 6 参考区间: 合 适 水 平 : ≤ 1.69mmol/L ; 升 高 : 1.69~ 2.26mmol/L;

临 界 范 围 : 2.26~ 5.63mmol/L ; 极 高 水 平 : ≧ 5.64mmol/L ; 7 临床意义: 血 清 TG 受 生 活 习 惯 、 饮 食 和 年 龄 等 多 种 因 素 影 响 , 在

个 体 内 及 个 体 间 的 波 动 较 大 。 由 于 TG 的 半 衰 期 短 (5-15 分 钟 ),进 食 高 脂 、 高 糖 和 高 热 量 饮 食 后 ,TG 可 明 显 增 高 , 且 以 乳 糜 微 粒 的 形 式 存 在 ,后 者 会 使 血 浆 变 得 浑 浊 ,甚 至 呈 乳 糜 样 。因 此 ,必 须 在 禁 食 12 -16 小时后静脉采集标本,以排除和减少饮食的影响。 (1)增 高 : 高 TG 血 症 也 有 原 发 的 与 继 发 的 两 类 。 前 者 多 有 遗 传 因 素 。 其 中 包 括 家 族 性 高 TG 血 症 与 家 族 性 混 合 型 高 脂 (蛋 白 )血 症 等 。 继 发 的见于糖尿病、糖原累积病、甲状腺功能低下、肾病综合征、妊娠、 口 服 避 孕 药 、酣 酒 等 ,但 不 易 分 辨 原 发 或 继 发 。大 量 前 瞻 性 的 研 究 证 实 , 富 含 TG 的 脂 蛋 白 是 CHD 的 独 立 的 危 险 因 子 , TG 增 加 表 明 患 者 存 在代谢综合征,需要治疗。 ⑵ 减 低 :甘 油 三 酯 降 低 , 胆 固 醇 正 常 , 则 临 床 意 义 不 大 。 减 低 见 于 低
β- 脂 蛋 白 血 症 和 无 β- 脂 蛋 白 血 症 ; 严 重 的 肝 脏 疾 病 、 吸 收 不 良 综 合

征、甲状腺功能亢进症、肾上腺皮质功能减退症等。 8.附 注 : (1)干 扰 因 素 :① 胆 红 素 >100μ mol/L 或 抗 坏 血 酸 >170μ mol/L 会 出 现 负干扰。②血红蛋白的干扰是复杂的,它本身的红色会引起正干扰。

溶 血 后 , 细 胞 中 的 磷 酸 酶 可 水 解 磷 酸 甘 油 产 生 负 干 扰 。 出 Hb<1g/L 红 当 时 反 映 为 负 干 扰 ,Hb>lg/L 反 映 出 正 干 扰 ,但 Hb<2g/L 时 干 扰 不 显 著 , 明 显 溶 血 标 本 不 宜 用 作 TG 测 定 . ⑵ 方 法 局 限 性 :本 试 剂 的 线 性 范 围 可 达 11.3mmol/L ,如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 进 行 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘以稀释的倍数。 ⑶危急值报告:无危急值。 ⑷注意事项: ①我国现阶段允许一步酶法与两步酶法并存, 求逐步 要 过 渡 到 统 一 采 用 两 步 法 。 在 未 统 一 方 法 之 前 , 实 验 室 报 告 TG 测 定 结 果 时 应 注 明 去 FG(游 离 甘 油 )值 或 未 去 FG 值 , 将 有 助 于 临 床 医 生 对 这 结 果 的 正 确 判 断 .② 正 常 人 血 清 FG 浓 度 平 均 约 0.11 mmol/L , 对 于 变 动 幅 度 较 大 的 TG 来 说 , 由 此 引 起 的 误 差 是 可 以 忽 略 的 , 但 有 些 标 本 中 FG 明 显 增 高 , 以 致 影 响 对 比 水 平 的 判 断 , 例 如 糖 尿 病 、 情 绪 应 激 、含 甘 油 的 药 物 (复 方 甘 油 、甘 油 果 糖 、甘 露 醇 、硝 酸 甘 油 )、静 脉 营 养 等 如 TG 高 而 血 清 不 挥 浊 者 应 排 除 高 TG 的 可 能 。 ③ 酶 法 测 定 TG 时 , 脂 蛋 白 脂 肪 酶 (LPL) 除 能 水 解 TG 外 , 还 能 水 解 甘 油 一 酷 和 甘 油 二 酯 (血 清 中 后 两 者 约 占 总 TG 的 3%),亦 被 计 算 在 FG 中,实际上测定的是总甘油。 ④ 酶 法 测 定 TG 反 应 达 终 点 时 间 37'C 不 应 超 过 8 min. ⑤ 试 剂 在 500nm 波 长 下 空 白 吸 光 度 应 < 0.050,否 则 应 视 为 过 期 试 剂 , 不能再使用. 9.参 考 文 献 :

9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006.

郧县中医院检验科 主题内容

生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-14 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 53 页 共 103 页

总胆固醇测定 总胆固醇测定(GHOD--PAP 法)

1.实验原理:胆 固 醇 ( cholesterol) 是 体 内 主 要 脂 类 之 一 。 人 体 内 胆

固 醇 来 源 除 由 食 物 摄 取 外 ,也 可 体 内 合 成 。人 体 除 脑 组 织 外 ,几 乎 所 有 组 织 都 合 成 胆 固 醇 ,其 中 肝 脏 是 合 成 胆 固 醇 的 主 要 场 所 。肝 脏 不 仅 是合成胆固醇的主要场所,也是调节血浆胆固醇水平和胆固醇脂 与 游离胆固醇比例的场所。 血中胆固醇有两种形式,一种是和脂肪酸 结 合 的 ,称 为 胆 固 醇 酯 ,另 一 种 是 未 和 脂 肪 酸 结 合 的 ,称 为 游 离 胆 固 醇 。 血 浆 脂 蛋 白 分 子 中 的 游 离 胆 固 醇 , 可 以 通 过 卵 磷 脂 -胆 固 醇 酰 基 转 移 酶 (LCAT) 催 化 作 用 而 接 受 卵 磷 脂 β - 碳 位 上 脂 酰 基 而 生 成 胆 固 醇 酯 。 LCAT 是 在 肝 脏 中 合 成 , 因 此 , 肝 细 胞 损 伤 时 , 血 浆 胆 固 醇酯化作用减弱,血浆中的胆固醇酯浓度下降。 正常人血浆中胆固 醇 约 1/3以 a- 脂 蛋 白 的 形 式 转 运 , 2/3 以 自 -脂 蛋 白 形 式 转 运 , TC =HDL-C + LDL-C + VLDL-C。 胆 固 醇 是 体 内 某 些 激 素 、 维 生 素 和 胆 汁 酸 等 合 成 的 原 料 。 肝 脏 中 的 胆 固 醇 , 约 80% 直 接 转 化 为 胆 酸 , 胆 酸 又 与 甘 氨 酸 或 牛 磺 酸 生 成 胆 汁 酸 ,随 胆 汁 进 入 肠 内 ,对 肠 内 脂 类 的 消 化 吸 收 起 重 要 作 用 。肾 上 腺 皮 质 内 的 胆 固 醇 ,经 酶 催 化 可 转 变 成 肾 上 腺 皮 质 激 素 和 性 激 素 。此 外 ,胆 固 醇 在 人 体 皮 肤 内 可 以 氧 化 脱 氢 生 成 7- 脱 氢 胆 固 醇 , 再 经 紫 外 线 照 射 生 成 维 生 素 D 3 , 它 能 促 进 钙 、 磷 的 吸 收 ,有 利 于 骨 髓 的 生 成 。 血 清 中 胆 固 醇 的 浓 度 可 作 为 脂 类 代 谢 的 指 标 ,但 脂 类 代 谢 又 常 与 糖 类 和 激 素 的 代 谢 密 切 相 关 ,故 在 其 他 物 质 代谢异常时也可 影响血清胆固醇的浓度。 酯 化 的 胆 固 醇 经 酶 水 解 后 ,经 胆 固 醇 氧 化 酶 氧 化 ,所 产 生 的 H2O2 然 后 以 Trinder 反 应 测 定 , 计 标 TCH 的 含 量 。 反 应 式 如 下 :

胆固醇酯 + 2H2O

胆固醇酯酶

胆固醇 + 脂肪酸

胆固醇 + O2

胆固醇酶

△4-胆兹烯酮 + H2O2

2 H202 + 4-氨基安替代比林 + 苯酚

POD

醌亚胺 + H2O

2.标本采集与处理:采 血 前 两 天 不 要 进 食 含 有 大 量 脂 肪 的 食 物 , 空 腹 至 少 8小 时 以 上 , 集 静 脉 血 抗 凝 血 或 血 清 。 清 标 本 应 及 时 测 定 , 24 采 血 如 小 时 不 能 完 成 测 定 ,可 密 封 臵 于 4'C 保 存 一 周 , -20'C 可 保 存 数 月 , -70'C 至 少 可 保 存 半 年 ;应 避 免 标 本 反 复 冻 融 。 3.实验试剂及仪器: 3.1 试 剂 : 使 用 北 京 莱 帮 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下





含 PH=6.9 300U/L 200U/L



Pipes 缓 冲 液 胆固醇酯酶 胆固醇氧化酶 4-氨 基 安 替 比 林 过氧化物酶 氯 酚

0.40mmol/L 1250U/L 26mmol/L

3.2仪 器 及 参 数 : 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 , 具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 5460nm 分析方法 终点法

副波长 反应温度

660nm 37℃

反应方向 样 品 /试 剂

向上 3: 300

4. 质 量 控 制 : 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ) .在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 ,若 失 控 , 查 明 原 因 并 采 取 措 施 。 5.计算方法: 样 本 中 TCH 的 含 量 = 〓C 0

△ At----------标 本 管 的 吸 光 度 变 化 ; △ As----------标 准 管 的 吸 光 度 变 化 ; C 0 ----------- 标 准 液 的 浓 度 ; 6 参考区间: 合 适 水 平 : ≤ 5.20mmol/L ; 临 界 范 围 : 5.20~ 5.70mmol/L ; 极 高 水 平 : ≧ 5.72mmol/L; 7 临床意义:影 响 TC 的 水 平 因 素 有 : ① 年 龄 与 性 别 ; TC 水 平 往 往 随 年 龄 上 升 , 但 到 70 岁 或 80 岁 后 有 所 下 降 , 中 青 年 女 性 低 于 男 性 , 50 岁 以 后 女 性 高 于 男 性 。 ② 长 期 的 高 胆 固 醇 、 高 饱 和 脂 肪 和 高 热 量 饮 食 可 使 TC 增 高 。 ③遗传因素。 ④ 其 他 , 如 缺 少 运 动 、 脑 力 劳 动 、 精 神 紧 张 等 可 能 使 TCH 升 高 . 高 TC 血 症 是 冠 心 病 的 主 要 危 险 因 素 之 一 。病 理 状 态 下 高 TC 有 原 发 的 与 继 发 的 两 类 。 原 发 的 如 家 族 性 高 胆 固 醇 血 症 (低 密 度 脂 蛋 白 受 体 缺 陷 )、 家 族 性 ApoB 缺 陷 症 、 多 源 性 高 TCH、 混 合 性 高 脂 蛋 白

血 症 。继 发 的 见 于 肾 病 综 合 征 、甲 状 腺 功 能 减 退 、糖 尿 病 、妊 娠 、胆 总管阻塞如患结石和肿瘤时胆固醇增高且伴有黄疸, 胆固醇酯与总 但 胆固醇的比值正常。 低 TC 血 症 也 有 原 发 的 与 继 发 的 , 前 者 如 家 族 性 的 无 β 或 β 低 脂 蛋 白 血 症 ;后 者 如 甲 亢 、 营 养 不 良 、 慢 性 消 耗 性 疾 病 等 : 低 TC 者 容 易 发 生 脑 出 血 ,也 可 以 易 患 癌 症 。肝 脏 是 胆 固 醇 及 胆 固 醇 卵 磷 脂 酰 基 转 移 酶 (LCAT)合 成 的 器 官 ,严 重 肝 病 患 者 血 清 TCH 不 一 定 很 低 ,但 由 于 血 清 LCAT 活 力 低 下 , 血 清 胆 固 醇 醋 占 TCH 的 比 例 可 低 达 50%以 下. 8.附 注 :⑴ 干 扰 因 素 :酶 法 测 定 TC 时 ,当 Hb>2g/L 会 引 起 正 干 扰 。胆 红 素 >0.1g/L 或 抗 坏 血 酸 >170 μ mol/L 会 出 现 负 干 扰 。 抗 坏 血 酸 与 甲基多巴浓度高于治疗水平时也使结果偏低。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 的 线 性 范 围 可 达 15.5mmol/L , 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 进 行 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果乘以稀释的倍数。 ⑶危急值报告:无危急值。 ⑷ 注 意 事 项 : ① 酶 法 测 血 清 TC 时 , 于 血 清 中 大 部 分 CHO 是 酯 化 的 , 由 而且血清基质对这项酶促反应有明显的影响, 不宜采用纯胆固醇结 故 晶 配 制 的 溶 液 作 为 TC 酶 法 分 析 的 标 准 液 , 而 应 以 准 确 定 值 的 血 清 做 为 标 准 参 考 物 质 。 ② 临 床 上 已 很 少 采 用 游 离 CHO 测 定 , 如 需 测 游 离 CHO, 简 便 的 也 是 用 酶 法 , 在 上 述 TC 测 定 用 酶 试 剂 中 省 去 CEH(胆 最 即 固 醇 酯 酶 )即 可 ,一 般 植 于 游 离 的 CHO 约 占 的 TCH 的 30%左 右 。 ③ 酶

法 测 定 TCH 反 应 达 终 点 时 间 37℃ 不 应 超 过 5min. ④ 试 剂 在 500nm 波 长 下 空 白 吸 光 度 应 < 0.050,否 则 应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 . 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006.

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生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-15 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 57 页 共 103 页

高密度脂蛋白胆固醇测定

高密度脂蛋白胆固醇测定(选择性抑制法)
1.实验原理:高 密 度 脂 蛋 白 ( HDL) 主 要 由 肝 脏 合 成 , 小 肠 也 合 成 一 部 分 。 HDL 即 a 脂 蛋 白 是 体 积 最 小 , 比 重 最 大 的 脂 蛋 白 , 含 脂 质 与 蛋 白 质 各 约 50%, 具 抗 动 脉 粥 样 硬 化 的 作 用 。 HDL 可 将 周 围 组 织 胆 固 醇 移 到 肝 脏 ,再 形 成 胆 汁 以 便 清 除 ,并 使 细 胞 对 LDL 的 摄 取 降 低 ,结 合 程 度 下 降 ,故 认 为 是 冠 心 病 的 防 护 因 子 。常 规 分 析 中 通 过 HDL 中 胆 固 醇 ( HDL-C) 的 含 量 间 接 反 映 HDL 的 水 平 。 本 方 法 以 液 体 双 试 剂 形 式 反 应 , 剂 一 中 含 有 聚 阴 离 子 和 表 面 活 性 剂 , 聚 阴 离 子 选 择 性 与 VLDL、 试 使 LDL 结 合 , 并 抑 制 试 剂 二 中 COD, CEH 对 VLDH-CH、 LDH-CH 起 作 用 , 从 而 选 择 性 作 用 于 HDL-CH,通 过 CEH-COD-POD 作 用 ,检 测 546nm 吸 光

度 与 HDL-C 成 正 比 。

HDL,LDL,CM,VLDL HDL-C H202 + 4-氨基安替代比林 + 苯酚 CE 、 COD

表面活性剂 HDL(可溶) △ 4-胆甾烯酮 + H202 POD 醌亚胺 + H2O

2 标本采集与处理:采 血 前 两 天 不 要 进 食 含 有 大 量 脂 肪 的 食 物 , 腹 至 少 空 8 小 时 以 上 ,采 集 静 脉 血 抗 凝 血 或 血 清 。血 清 标 本 应 及 时 测 定 ,如 24 小 时 不 能 完 成 测 定 , 可 密 封 臵 于 4℃ 保 存 一 周 , -20℃ 可 保 存 数 月 , -70℃ 至 少 可 保 存 半 年 ;应 避 免 标 本 反 复 冻 融 。 3.实验试剂及仪器: 3.1 试剂:使用东欧津玛试剂公司检测试剂盒。其试剂组成如下 成 份 含 量

R1:4-氨 基 安 替 比 林 聚阴离子 表面活性剂 1 ESPAS R2:胆 固 醇 酯 酶 过氧化物酶 胆固醇氧化酶 表面活性剂 2

≧ 0.5mmol/L

适 适

量 量

≧ 0.5mmol/L ≧ 0.8KU/L ≧ 5 KU/L ≧ 0.5KU/L





3.2 仪 器 及 参 数 : 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导

书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 副波长 反应温度 546nm 660nm 37℃ 分析方法 反应方向 S:R1:R2 终点法 向上 3:300:100

4.质量控制:在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ) .在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 ,若 失 控 , 查 明 原 因 并 采 取 措 施 。

5.计算方法:样本中 HDL-C 的含量=

〓C0

△At----------标本管的吸光度变化; △As----------标准管的吸光度变化; C0-----------标准液的浓度; 6 参考区间: 我 国 成 年 男 性 HDL-C 多 在 1.16~ 1.42mmol/L, 女 性 较

高 , 在 1.29 ~ 1. 55mmol/L。 年 龄 的 变 动 较 小 。 常 以 0.9mmol/L 多 随 通 以 下 为 明 显 偏 低 。 正 常 人 HDL-C 占 TCH 的 25%~ 30%. 我 国 《 血 脂 异 常 防 治 建 议 》 理 想 范 围 : >1.04mmol/L : 降 低 : <0.91mmol/L

NCEP, ATPIII 提 出 的 医 学 决 定 水 平 : ( 1) < I.03mmol/L 为 降 低 , CHD 危 险 性 增 高 。 ( 2) ≧ 1. 55mmol/L 为 负 危 险 因 素 。 ATPIII 将 HDL-C 从 原 来 的 <0.9mmol/L 提 高 到 <1.03 mmol/L 是 为 了

让 更 多 的 人 得 到 预 防 性 治 疗 .男 性 将 从 原 来 的 15%提 高 到 约 40%, 性 女 从 原 来 的 5%提 高 到 15%的 人 群 被 划 为 高 危 人 群 )。 7 临床意义: ⑴ HDL-C 增 高 : HDL-C 增 高 对 防 止 动 脉 粥 样 硬 化 、 预 防 冠 心 病 有 重 要 作 用 。 HDL-C 与 TG 呈 负 相 关 .与 冠 心 病 的 发 病 也 呈 负 相 关 。 HDL-C 水 平 低 的 个 体 患 冠 心 病 的 危 险 性 大 , HDL-C 水 平 高 的 个 体 患 冠 心 病 的 危 险 性 小 , 故 HDL-C 可 用 于 评 价 患 冠 心 病 的 危 险 性 . 绝 经 前 女 性 HDL-C 水 平 较 高 , 男 性 和 绝 经 后 女 性 则 较 低 。 ⑵ HDL-C 减 低 : 常 见 于 慢 性 肝 炎 、肝 硬 化 动 脉 粥 样 硬 化 、急 性 感 染 、 糖 尿 病 、代 谢 综 合 征 、慢 性 肾 功 能 衰 竭 、肾 病 综 合 征 ,以 及 应 用 雄 激 素 、 自 -受 体 阻 滞 剂 和 孕 国 等 药 物 . 8.附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 :胆 红 素 ≤ 50mg/dl,血 红 蛋 白 500mg/dl 时 ,对 测 定 值 几 乎没有影响。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 的 线 性 范 围 可 达 2.6mmol/L , 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 进 行 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果乘以稀释的倍数。 ⑶危急值报告:无危急值。 ⑷注意事项: ①对严重乳糜血的标本最好采用电泳法测定 HDL-C 。 ② 试 剂 盒 提 供 的 校 准 物 :其 定 值 应 可 溯 源 到 参 考 方 法 的 值 并 尽 可 能 无 基 质 影 响 。 采 用 HDL-C 参 考 方 法 或 指 定 的 比 较 方 法 定 值 的 可 人 血 清 ③ 试 剂 在 500nm 波 长 下 空 白 吸 光 度 应 ≤ 0.080,或 试 剂 出 现 变

浑 浊 、 沉 淀 、 变 色 则 应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 . 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006.

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文件编号:检验科-SH-16 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 61 页 共 103 页

低密度脂蛋白胆固醇测定

低密度脂蛋白胆固醇测定(选择性抑制法)

1.实验原理: 本 法 根 据 各 类 脂 蛋 白 物 理 化 学 性 质 的 不 同 , 与 表 面 活 性 剂 的 反 应 性 也 不 同 的 原 理 。使 用 两 种 表 面 活 性 剂 。在 第 一 反 应 中 ,表 面 活 性 剂 1能 改 变 LDL 以 外 脂 蛋 白 (CM 、 VLD L、 HDL 等 )的 结 构 , 促 进 胆 固 醇 氧 化 酶 (COD)、胆 固 醇 酯 酶 (CE) 与 CM 、VLDL ,HDL 反 应 , 但 与 LDL 不 发 生 反 应 。 在 表 面 活 性 剂 1 的 作 用 下 , LDL 以 外 的 脂蛋白被消除。在第二反应中,表面活性剂 2 能促进各类脂蛋白的 酶 反 应 。 在 第 一 反 应 中 没 有 被 消 除 的 LDL-C 在 表 面 活 性 剂 2 的 作 用 下,产生呈色反应。 第一反应: HDL,CM,VLDL H2O2 H2O2 第二反应: LDL H2O2 + 4-氨基替匹林 表面活性剂 2 微粒化胆固醇 + 4-氨基安替代比林 + 苯酚 POD 醌亚胺(红色) + H2O 2 标本采集与处理: 采 血 前 两 天 不 要 进 食 含 有 大 量 脂 肪 的 食 物 , 空 腹 至 少 8 小 时 以 上 ,采 集 静 脉 血 抗 凝 血 或 血 清 。血 清 标 本 应 及 时 测 定 ,如 24 小 时 不 能 完 成 测 定 ,可 密 封 臵 于 4℃ 保 存 一 周 , -20℃ 可 保 存 数 月 , -70℃ 至 少 可 保 存 半 年 ;应 避 免 标 本 反 复 冻 融 。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 东 瓯 津 玛 试 剂 公 司 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下 成 份 含 量 POD 无 色 CE 、COD H2O2 表面活性剂1 微粒化胆固醇 CE COD

R1:4-氨 基 安 替 比 林 聚阴离子 表面活性剂 1 胆固醇酯酶

≧ 0.5mmol/L

适 适

量 量

≧ 0.8KU/L

胆固醇氧化酶 R2:过 氧 化 物 酶 ESPAS 表面活性剂 2

≧ 0.5KU/L ≧ 1KU/L ≧ 1mmol/L





3.2 仪器及参数: 3.2.1 使用凯美雅生化分析仪,具体的操作详见生化分析仪作业指导书. 3.2.2 分析参数: 主波长 副波长 反应温度 546nm 660nm 37℃ 分析方法 反应方向 S:R1:R2 终点法 向上 4:300:100

4.质量控制:在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质

控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ).在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 , 若失控,查明原因并采取措施。
5. 计算方法:样本中 LDL-C 的含量=

〓C0

△At----------标本管的吸光度变化; △As----------标准管的吸光度变化; C0-----------标准液的浓度; 6 参考区间: LDL-C 水 平 随 年 龄 上 升 , 中 、 老 年 人 平 均 约 2.7 ~

3.1mmol/L, 边 缘 水 平

3.10

~ 3.

6

mmol/L , 危 险 水

平 >3.6mmol/L( 危 险 是 指 动 脉 粥 样 硬 化 发 生 的 潜 在 危 险 性 ) 。 儿 童 <2.8mmol/L。 我 国 《 血 脂 异 常 防 治 建 议 》 理 想 范 围 : < 3.12mmol/L; : 边 缘 升 高 :3.15~ 3.61mmol/L ; 升 高 : > 3.64mmol/L; NCEP, ATPIII 提 出 的 医 学 决 定 水 平 : ( 1) 理 想 水 平 : < 2.58mmol/L 。 ( 2) 接 近 理 想 : 2.58~ 3.33mmol/L。 ( 3) 边 缘 升 高 : 3.64~ 4.41mmol/L。 ( 4) 增 高 : 4.138~ 4.8mmol/L。 ( 5) 很 高 : >4.91mmol/L 7 临床意义: ( 1) LDL-C 增 高 :① 判 断 发 生 冠 心 病 的 危 险 性 :LDL-C 是 动 脉 粥 样 硬 化 的 危 险 因 子 , LDL-C 水 平 与 冠 心 病 发 病 呈 正 相 关 , 因 此 , LDL-C 可用于判断发生冠心病的危险性 。 ② 其 他 :遗 传 性 高 脂 蛋 白 血 症 、 甲 状 腺 功 能 减 退 症 、 肾 病 综 合 征 、 阻 塞 性 黄 疸 、肥 胖 症 以 及 应 用 雄 激 素 、 β -受 体 阻 滞 剂 、糖 皮 质 激 素 等。 ( 2) LDL-C 减 低 : 常 见 于 无 β -受 体 脂 蛋 白 血 症 、 甲 状 腺 功 能 亢 进 症、吸收不良、肝硬化以及低脂饮食和运动等。 8.附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 :胆 红 素 ≤ 40mg/dl, 血 红 蛋 白 ≤ 500mg/dl, 抗

坏 血 酸 ≤ 50mg/dl 时 , 对 测 定 值 几 乎 没 有 影 响 。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 的 线 性 范 围 可 达 11.6mmol/L , 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 进 行 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果乘以稀释的倍数。 ⑶危急值报告:无危急值。 ⑷ 注 意 事 项 : ① 对 严 重 乳 糜 血 的 标 本 最 好 采 用 电 泳 法 测 定 LDL-C 。 ② 试 剂 盒 提 供 的 校 准 物 :其 定 值 应 可 溯 源 到 参 考 方 法 的 值 并 尽 可 能 无 基 质 影 响 。 可 采 用 LDL-C 参 考 方 法 或 指 定 的 比 较 方 法 定 值 的 人 血 清 ③ 试 剂 在 546nm 波 长 下 空 白 吸 光 度 应 ≤ 1.000, 否 则 则 应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 .④ 当 采 用 2mmol/L 的 浓 度 标 准 液 时 , 吸 光 度 值 应 为 0.070。⑤ Friedewa1d 公 式 推 算 法 :LDL-C=TCH-(HDL-C)-(VLDL-C),上 式 中 的 VLDL-C=0.2xTG,或 VLDL-C=0.455xTG( mmol/L) 。此 公 式 的 计 算 依 据 为 :TCH= HDL-C +LDL-C+ VLDL-C 。 由 于 VLDL-C 中 所 含 的 TG 含 量 较 多 (正 常 时 为 44%~ 60%) ,正 常 人 空 腹 时 血 浆 中 基 本 不 存 在 乳 糜 微 粒 (CM), 因 此 血 浆 中 绝 大 部 分 的 TG 都 存 在 于 VLDL 中 , 当 TG<400mg/L 或 <4.52 mmol/L 时 , 可 以 按 以 上 公 式 求 VLDL- C,进 而 求 得 LDL-C.但 当 血 浆 中 的 TG>400mg/L 或 >4.52mmol/L 时 , 由 于 TG 在 LDL-C 中 的 比 例 增 加 , 因 此 若 利 用 以 上 公 式 估 算 LDL-C 可 引 人 较 大 误 差 。 此 情 况 , 验 室 往 往 不 能 利 用 Friedewa1d 公 式 获 得 LDL-C 遇 实 的 结 果 。⑥ NCEP"对 LDL-C 测 定 的 建 议 中 "指 出 :应 开 发 LDL-C 测 定 的 新 方 法 , 应 是 直 接 测 定 LDL-C 而 不 是 用 两 个 或 更 多 测 定 值 之 间 的 计 算 , 匀 相 法 符 合 这 一 要 求 。 另 外 , LDL-C 和 Lp(a), 过 去 流 行 病 的 基

础资料也都是基于上述测定方法。 此建议中指出新的方法的测定值 因 是 否 包 括 IDL-C 和 的 Lp(a)的 值 应 确 定 , 对 于 此 点 , 目 前 还 没 有 权 威 性 的 评 价 .NCEP 提 出 以 LDL-C 作 为 高 胆 固 醇 血 症 的 分 类 和 治 疗 标 准 。 因此,测定的准确性尤为重要。
9 .参 考 文 献 :

9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 . 全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006.

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生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-17 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 65 页 共 103 页

血清钾离子测定

血清钾离子测定(离子选择电极法)
1 实验原理:钾 是 细 胞 内 液 的 主 要 阳 离 子 , 约 98%的 钾 存 在 于 细 胞 内 。 组 织 细 胞 内 钾 平 均 浓 度 为 150 mmol/L , 红 细 胞 内 钾 浓 度 约 为 105 mmol/L , 血 清 中 仅 有 3.5~ 5.5mmol/L 人 体 中 的 钾 90%从 食 物 摄 入 , 而 通 过 肠 道 吸 收 人 血 液 。钾 在 蛋 白 质 和 糖 的 代 谢 、维 持 心 肌 和 神 经 肌 肉 正常的应激性、维持酸碱平衡等方面起重要作用。 离子选择电极分析法是以测量电池的电动势为基础的定量分析 方 法 。将 离 子 选 择 电 极 和 一 个 参 比 电 极 连 接 起 来 ,臵 于 待 测 的 电 解 质 溶 液 中 , 就 构 成 一 个 测 量 电 池 , 此 电 池 的 电 动 势 (E) 与 被 测 离 子 活 度

的 对 数 符 合 能 斯 特 (nernst) 方 程 。 离 子 选 择 电 极 由 钾 、 钠 离 子 不 同 活度的作用而产生不同的电位。这种电位的变化由离子活度所决定, 与钾、钠离子的浓度成比例。 本 试 验 室 采 用 的 是 间 接 法 , 原 理 如 下 : 间 接 电 位 法 样 品 (血 清 、 血 浆 、 脑 脊 液 )与 标 准 被 要 用 指 定 离 子 强 度 与 pH 值 的 稀 释 液 做 高 比 例 稀 释 ,再 送 入 电 极 管 道 ,测 量 其 电 位 ,这 时 样 品 和 标 准 的 pH 值 和 离 子 强 度 趋 向 一 致 ,所 测 溶 液 的 离 子 活 度 等 于 离 子 浓 度 ,所 以 间 接 电 住所测得结果与火焰光度法相同,以浓度报告。 2.标本采集与处理:血 清 或 肝 素 锂 抗 凝 血 浆 , 标 本 不 能 溶 血 , 若 不 能 立 即 测 定 应 及 时 分 离 血 清 ,臵 冰 箱 保 存 。若 遇 标 本 溶 血 ,应 在 报 告 单 上 注明,以免临床医生误解 。 3.实验试剂及仪器: 3.1 试 剂 : 使 用 希 森 美 康 电 解 质 分 析 仪 配 套 的 试 剂 。 3.2 仪 器 : 使 用 希 森 美 康 ( 型 号 为 Easylyte PLUS) 电 解 质 分 析 仪 。 3.2.1 操 作 详 见 说 明 书 。
4.质量控制:在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质

控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ).在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 , 若失控,查明原因并采取措施。
5. 计算方法:样本中 LDL-C 的含量=

〓C0

△At----------标本管的吸光度变化; △As----------标准管的吸光度变化;

C0-----------标准液的浓度; 6 参考区间: .血清钾3.5~5.5mmol/L。

7 临床意义: ⑴ 血 清 钾 增 高 :可 见 于 肾 上 腺 皮 质 功 能 减 退 症 、 急 性 或 慢 性 肾 功 能 衰 竭、休克、组织挤压伤重度溶血、口服或注射含钾液过多等。 ⑵ 血清钾降低:常见于严重腹泻、呕吐、肾上腺皮质功能亢进、服 用 利 尿 剂 、胰 岛 素 的 应 用 、钡 盐 与 棉 籽 油 中 毒 。家 族 性 周 期 性 麻 痹 在 发 作 时 降 低 ,可 低 至 2.5mmol/L 左 右 ,但 在 发 作 间 歇 期 间 可 正 常 。大 剂量注射青霉素钠盐时肾小管会大量失钾。 8.附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 :溶 血 时 , 细 胞 内 钾 释 放 到 细 胞 外 , 不 同 程 度 的 溶血都对检测结果有正干扰,干扰程度与溶血的严重度相关. ⑵ 危 急 值 报 告 : K <2.80mmol/L 或 >6.0mmol/L ⑶注意事项: ①对过高或过低的标本均应重复测定, 时与 同 临 床 联 系 ,防 止 标 本 采 集 不 合 格 而 造 成 的 误 差 。如 在 临 床 经 常 发 生 的 高 血 钾 检 测 结 果 已 超 过 致 死 量 ,而 病 人 无 任 何 临 床 表 现 ,应 考 虑 此 血 液 在 输 入 侧 抽 取 ,且 输 入 的 液 体 中 含 有 钾 。② 生 产 钾 、钠 离 子 选 择 电 极 分 析 仪 的 厂 家 很 多 ,所 用 的 电 极 基 本 相 同 ,较 多 采 用 硅 酸 镍 铝 玻 璃 电极膜制成,寿命较长。饵电极多采 用缴氨霉素膜,需定期更换。 各 种 型 号 ISE 分 析 仪 的 试 剂 配 方 、 试 剂 用 量 、 操 作 方 法 有 所 不 同 , 一 般 要 进 行 下 列 步 骤 : 1.开 启 仪 器 ,清 洗 管 道 。 2. 用 适 合 本 仪 器 的 低 、高 值 斜 率 液 进 行 两 点 定 标 。 3. 间 接 电 位 法 的 样 品 由 仪 器 自 动 稀 释 后 再 行 测 定 .直 接 电 位 法 的 样 品 可 直 接 吸 入 电 极 管 道 进 行 测 定 。 4.
2+

测 定 结 果 由 仪 器 内 微 处 理 器 计 算 后 打 印 数 值 。 5.每 天 用 完 后 , 清 洗 . 电 极 和 管 道 后 再 关 机 。若 用 于 急 诊 检 验 室 ,可 不 关 机 ,自 动 定 时 清 洗 和 单 点 校 准 , 随 时 使 用 。 ③ 电 解 质 的 排 除 效 应 :是 指 电 解 质 从 总 血 浆 体积的固体部分中排出出来。 是说主要的的电解质基本上被禁闭在 就 水 相 中 。血 浆 中 总 固 体 主 要 是 蛋 白 质 和 脂 类 的 体 积 大 约 占 7%,而 大 约 93%的 血 浆 体 积 是 水 。 在 做 间 接 ISE 测 定 之 前 , 要 将 一 定 体 积 ( 例 如 10μ L) 总 血 浆 进 行 稀 释 , 实 际 上 只 有 9.3μ L 血 浆 加 到 稀 释 液 中 。 的 而 因 此 一 份 血 浆 间 接 法 测 定 钠 浓 度 为 145mmol/L,这 属 于 总 血 浆 体 积 中 的 钠 离 子 浓 度 ,而 不 是 血 浆 水 体 积 中 的 钠 离 子 浓 度 。如 果 该 份 血 浆 含 有 93%的 水 , 么 血 浆 中 钠 离 子 浓 度 应 为 156mmol/L. 在 血 浆 电 解 质 分 那 析 中 出 现 这 种 负 误 差 ,许 多 科 学 家 已 认 识 到 。当 血 浆 水 中 电 解 质 的 浓 度 属 于 生 理 时 ,只 要 默 认 正 常 个 体 的 血 浆 水 体 积 非 常 稳 定 ,这 些 误 差 可 忽 视 。实 际 上 所 有 电 解 质 参 考 区 间 都 是 基 于 这 种 假 设 ,反 映 的 是 总 血浆体积中的浓度。 实在临床化学实验室中测定的各种电解质浓度 确 都 是 指 总 血 浆 体 积 浓 度 ,而 不 是 指 血 浆 水 体 积 浓 度 。当 存 在 病 理 情 况 时 ,血 浆 水 体 积 改 变 了 ,例 如 高 脂 血 症 和 高 蛋 白 血 症 ,此 时 的 电 解 质 排出作用影响明显了。在这种病理情况下,样品在分析前进行稀释, 测 定 值 出 现 假 性 偏 低 。 了 使 直 接 ISE 法 的 测 定 结 果 与 间 接 法 结 果 相 为 当 , 将 ISE 方 法 的 测 定 结 果 乘 以 0.93。 直 接 测 定 结 果 要 比 间 接 法 测 定结果更具有生理意义。 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】

东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006

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文件编号:检验科-SH-18 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 69 页 共 103 页

血清钠离子测定

血清钠离子测定(离子选择电极法)
1.实验原理:钠 是 细 胞 外 液 的 主 要 阳 离 子 ,人 体 钠 约 44%分 布 在 细 胞 外 液 , 9% 存 在 于 细 胞 内 液 , 其 余 分 布 在 骨 髓 中 。 在 细 胞 内 液 , 钠 的 含 量 只 有 10 mmol/L , 而 在 细 胞 外 液 俐 的 浓 度 约 为 140 mmol/L, 正 常 成 人 每 日 摄 入 钠 100 ~ 200mmoL , 全 部 经 胃 肠 道 吸 收 .机 体 对 铀 的 保 留 机 制 比 较 完 整 , 尤 其 是 肾 脏 的 保 钠 作 用 。 90% 钠 由 尿 液 排 出 , 其 余 经 粪 便 、汗 液 和 乳 汁 液 排 出 。钠 的 主 要 功 能 是 维 持 体 液 的 正 常 渗 透 压 及 酸 碱 平 衡 ,并 具 有 维 持 肌 肉 、神 经 的 应 激 性 作 用 。体 内 钠 的 平 衡 主 要 通过肾脏调节。 离子选择电极分析法是以测量电池的电动势为基础的定量分析 方 法 。将 离 子 选 择 电 极 和 一 个 参 比 电 极 连 接 起 来 ,臵 于 待 测 的 电 解 质 溶 液 中 , 就 构 成 一 个 测 量 电 池 , 此 电 池 的 电 动 势 (E) 与 被 测 离 子 活 度 的 对 数 符 合 能 斯 特 (nernst) 方 程 。 离 子 选 择 电 极 由 钾 、 钠 离 子 不 同 活度的作用而产生不同的电位。这种电位的变化由离子活度所决定, 与钾、钠离子的浓度成比例。 本 试 验 室 采 用 的 是 间 接 法 , 原 理 如 下 : 间 接 电 位 法 样 品 (血 清 、 血 浆 、 脑 脊 液 )与 标 准 被 要 用 指 定 离 子 强 度 与 pH 值 的 稀 释 液 做 高 比 例 稀 释 ,再 送 入 电 极 管 道 ,测 量 其 电 位 ,这 时 样 品 和 标 准 的 pH 值 和 离 子 强 度 趋 向 一 致 ,所 测 溶 液 的 离 子 活 度 等 于 离 子 浓 度 ,所 以 间 接 电 住所测得结果与火焰光度法相同,以浓度报告。 2.标本采集与处理:血 清 或 肝 素 锂 抗 凝 血 浆 , 标 本 不 能 溶 血 , 若 不 能 立

即 测 定 应 及 时 分 离 血 清 ,臵 冰 箱 保 存 。若 遇 标 本 溶 血 ,应 在 报 告 单 上 注明,以免临床医生误解 。 3.实验试剂及仪器: 3.1 试 剂 : 使 用 希 森 美 康 电 解 质 分 析 仪 配 套 的 试 剂 。 3.2 仪 器 : 使 用 希 森 美 康 ( 型 号 为 Easylyte PLUS) 电 解 质 分 析 仪 。 3.2.1 操 作 详 见 说 明 书 。
4.质量控制:在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质

控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ).在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 , 若失控,查明原因并采取措施。 5. 计算方法:样本中 LDL-C 的含量= 〓C0

△At----------标本管的吸光度变化; △As----------标准管的吸光度变化; C0-----------标准液的浓度; 6 参考区间: .血清钠135~145mmol/L。

7 临床意义: (1)血 清 钠 降 低 :血 清 钠 浓 度 低 于 135mmol/L 为 低 钠 血 症 , 床 上 常 见 临 于 :① 胃 肠 道 失 钠 :可 见 于 幽 门 梗 阻 ,呕 吐 ,腹 泻 ,胆 道 、腕 腺 手 术 后 造 壁 、 引 捕 ;等 都 可 丢 失 大 量 消 化 液 而 发 生 缺 钠 。 ② 尿 钠 排 出 增 多 : 见 于 严 重 肾 孟 肾 炎 、肾 小 管 严 重 损 害 、肾 上 腺 皮 质 机 能 不 全 、糖 尿 病 、 应 用 利 尿 剂 治 疗 等 。 ③ 皮 肤 失 钠 :大 量 出 汗 时 ,如 只 补 充 水 分 而 不 补

充 钠 。大 面 积 烧 伤 、创 伤 ,体 液 及 钠 从 创 口 大 量 丢 失 ,亦 可 引 起 低 血 钠 。 抗 利 尿 激 素 (ADH)过 多 :肾 病 综 合 征 的 低 蛋 白 血 症 、 硬 化 腹 水 、 ④ 肝 右心衰竭时有效血容量减低等都引起抗利尿激素增多,血钠被稀释。 (2) 血 清 钠 增 高 :血 清 钠 超 过 145mmol/L 为 高 血 钠 , 可 见 于 : ① 肾 上 腺 皮 质 功 能 亢 进 ,如 库 欣 综 合 征 、原 发 性 醛 固 酮 增 多 症 ,由 于 肾 上 腺 皮质激素的排钾保钠作用, 肾小管对钠的重吸收增加, 现高血钠。 使 出 ② 严 重 脱 水 :体 内 水 分 丢 失 比 钠 丢 失 多 时 发 生 高 张 性 脱 水 .③ 中 枢 性 尿 崩 症 时 ADH 分 泌 量 减 少 , 尿 量 大 增 , 如 供 水 不 足 , 血 钠 增 高 。 8 附 注 :⑴干 扰 因 素 :溶 血 时 ,细 胞 内 钾 释 放 到 细 胞 外 ,不 同 程 度 的 溶 血都对检测结果有正干扰,干扰程度与溶血的严重度相关. ⑵ 危 急 值 报 告 : Na 2 + <120mmol/L 或 >160mmol/L ⑶注意事项: ①对过高或过低的标本均应重复测定,同 时 与 临 床 联 系 ,防 止 标 本 采 集 不 合 格 而 造 成 的 误 差 。② 生 产 钾 、钠 离 子 选 择 电 极 分 析 仪 的 厂 家 很 多 ,所 用 的 电 极 基 本 相 同 ,销 多 采 用 硅 酸 惺铝玻璃电极膜制成,寿命较长。饵电极多采 用缴氨霉素膜,需定 期 更 换 。 各 种 型 号 ISE 分 析 仪 的 试 剂 配 方 、 试 剂 用 量 、 操 作 方 法 有 所 不 同 , 一 般 要 进 行 下 列 步 骤 : 1.开 启 仪 器 , 清 洗 管 道 。 2. 用 适 合 本 仪 器 的 低 、高 值 斜 率 液 进 行 两 点 定 标 。 3. 间 接 电 位 法 的 样 品 由 仪 器 自 动 稀 释 后 再 行 测 定 .直 接 电 位 法 的 样 品 可 直 接 吸 入 电 极 管 道 进 行 测 定 。 4. 测 定 结 果 由 仪 器 内 微 处 理 器 计 算 后 打 印 数 值 。5.每 天 用 完 后 , 清 洗 .电 极 和 管 道 后 再 关 机 。 若 用 于 急 诊 检 验 室 , 可 不 关 机 , 自 动 定 时 清 洗 和 单 点 校 准 , 随 时 使 用 。 ③ 电 解 质 的 排 除 效 应 :是 指 电

解质从总血浆体积的固体部分中排出出来。 是说主要的的电解质基 就 本上被禁闭在水相中。 浆中总固体主要是蛋白质和脂类的体积大约 血 占 7%,而 大 约 93%的 血 浆 体 积 是 水 。 在 做 间 接 ISE 测 定 之 前 , 要 将 一 定 体 积 ( 例 如 10μ L) 的 总 血 浆 进 行 稀 释 , 而 实 际 上 只 有 9.3μ L 血 浆 加 到 稀 释 液 中 。 因 此 一 份 血 浆 间 接 法 测 定 钠 浓 度 为 145mmol/L, 这 属于总血浆体积中的钠离子浓度,而不是血浆水体积中的钠离子浓 度 。 如 果 该 份 血 浆 含 有 93% 的 水 , 那 么 血 浆 中 钠 离 子 浓 度 应 为 156mmol/L.在 血 浆 电 解 质 分 析 中 出 现 这 种 负 误 差 , 多 科 学 家 已 认 识 许 到 。当 血 浆 水 中 电 解 质 的 浓 度 属 于 生 理 时 ,只 要 默 认 正 常 个 体 的 血 浆 水 体 积 非 常 稳 定 ,这 些 误 差 可 忽 视 。实 际 上 所 有 电 解 质 参 考 区 间 都 是 基 于 这 种 假 设 ,反 映 的 是 总 血 浆 体 积 中 的 浓 度 。确 实 在 临 床 化 学 实 验 室中测定的各种电解质浓度都是指总血浆体积浓度, 不是指血浆水 而 体 积 浓 度 。当 存 在 病 理 情 况 时 ,血 浆 水 体 积 改 变 了 ,例 如 高 脂 血 症 和 高蛋白血症, 时的电解质排出作用影响明显了。 这种病理情况下, 此 在 样 品 在 分 析 前 进 行 稀 释 ,测 定 值 出 现 假 性 偏 低 。为 了 使 直 接 ISE 法 的 测 定 结 果 与 间 接 法 结 果 当 , 将 ISE 方 法 的 测 定 结 果 乘 以 0.93。 直 接 测定结果要比间接法测定结果更具有生理意义。

9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006

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文件编号:检验科-SH-19 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 72 页 共 103 页

血清氯离子测定

血清氯离子测定(离子选择电极法)
1.实验原理:氯 离 子 是 细 跑 外 液 中 的 主 要 阴 离 子 , 它 和 与 它 相 对 应 的 阳离子钠离子一起在维持细胞外液渗透压方面起着十分重要的作用。 另 外 Cl- 在 红 细 跑 内 外 的 转 移 , 为 以 HC03- 的 形 式 运 输 CO2 提 供 了 必 不 可 少 的 条 件 。因 此 对 体 内 酸 碱 平 衡 的 调 节 也 有 重 要 影 响 。此 外 CL-还 参 与 胃 酸 的 形 成 , 还 是 淀 粉 酶 的 激 活 剂 。 机 体 通 过 膳 食 的 方 式 摄 人 氯 和 铺 ,成 人 每 日 需 要 量 5~ 9g。通 常 摄 入 体 内 Nacl 的 量 大 于 其 需 要 量 ,所 以 一 般 情 况 下 人 体 不 会 缺 钠 和 氯 。氯 主 要 经 肾 随 尿 液 排 出 体 外 ,还 有 少 部 分 以 出 汗 形 式 丢 失 。离 子 选 择 电 极 分 析 法 是 以 测 量 电 池的电动势为基础的定量分析方法。氯电极是由电极基部和头部组

成 。 头 部 含 银 -氯 化 银 粒 子 , 当 溶 液 中 的 氯 离 子 与 电 极 头 部 表 面 接 触 时 , 会 产 生 服 从 能 斯 特 (nernst)方 程 的 电 动 势 , 与 参 比 电 极 相 连 就 能 测 出 样 品 中 氧 化 物 的 浓 度 , 以 mmol/L 表 示 。 同 样 的 有 直 接 法 与 间 接法。 2.标本采集与处理:血 清 或 肝 素 锂 抗 凝 血 浆 , 标 本 不 能 溶 血 , 若 不 能 立 即 测 定 应 及 时 分 离 血 清 ,臵 冰 箱 保 存 。若 遇 标 本 溶 血 ,应 在 报 告 单 上 注明,以免临床医生误解 。 3.实验试剂及仪器: 3.1 试 剂 : 使 用 希 森 美 康 电 解 质 分 析 仪 配 套 的 试 剂 。 3.2 仪 器 : 使 用 希 森 美 康 ( 型 号 为 Easylyte PLUS) 电 解 质 分 析 仪 。 3.2.1 操 作 详 见 说 明 书 。

4.质量控制:在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质

控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ).在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 , 若失控,查明原因并采取措施。
5. 计算方法:样本中 LDL-C 的含量=

〓C0

△At----------标本管的吸光度变化; △As----------标准管的吸光度变化; C0-----------标准液的浓度; 6 参考区间: 96 ~108mmol/L。

7 临床意义:

(1)血 清 (浆 )氯 化 物 增 高 :临 床 上 高 氯 血 症 常 见 于 高 钠 血 症 、 水 大 于 失 失 盐 、 氯 化 物 相 对 浓 度 增 高 ;急 性 或 慢 性 肾 小 球 肾 炎 所 致 的 肾 功 能 衰 竭 及 尿 道 、输 尿 管 梗 阻 或 心 力 衰 竭 时 ,肾 排 出 氯 化 物 减 少 ,使 血 清 氯 化 物 升 高 ;过 量 注 射 生 理 盐 水 等 。 (2)血 清 (浆 )氯 化 物 减 低 :临 床 上 低 氯 血 症 较 为 多 见 。常 见 原 因 有 氯 化 铀 的 异 常 丢 失 或 摄 人 减 少 ,如 严 重 的呕吐、腹泻或胃肠道造瘦时丢失大量含氯的胃肠液、膜液、胆汁。 慢 性 肾 上 腺 皮 质 功 能 减 退 ,肾 功 能 衰 竭 或 严 重 的 糖 尿 病 患 者 ,排 尿 液 过多而丢失大量氯化物。长期饥饿或无盐饮食等亦可使氯摄入不足。 (3) 脑 脊 液 低 氯 症 :脑 脊 液 为 细 胞 外 液 的 一 部 分 , 低 钠 血 症 均 伴 有 脑 脊 液 低 氯 症 。 重 症 结 核 性 脑 膜 炎 时 , 氯 化 物 含 量 显 著 降 低 ;化 脏 性 脑 膜炎时可见减少; 通型脊髓灰质炎与病毒性脑炎时基本正常乞重型 普 中 枢 神 经 系 统 感 染 时 ,抗 利 尿 激 素 分 泌 增 多 ,因 水 潴 留 而 发 生 稀 释 性 低钠、低氯血症,脑脊液氧化物亦相应减低。

8附 注 : ⑴ 取 血 后 应 迅 速 将 血 浆 或 血 清 分 离 ,以 免 因 血 浆 中 HC03-与 红细胞内氯离子发生转移而使血浆氧化物测定结果偏离。 ⑵ 危 急 值 报 告 : CL 2 + <85mmol/L 或 >120mmol/L ⑶注意事项: ①对过高或过低的标本均应重复测定,同 时 与 临 床 联 系 ,防 止 标 本 采 集 不 合 格 而 造 成 的 误 差 。② 生 产 钾 、钠 离 子 选 择 电 极 分 析 仪 的 厂 家 很 多 ,所 用 的 电 极 基 本 相 同 ,销 多 采 用 硅 酸 惺铝玻璃电极膜制成,寿命较长。饵电极多采 用缴氨霉素膜,需定 期 更 换 。 各 种 型 号 ISE 分 析 仪 的 试 剂 配 方 、 试 剂 用 量 、 操 作 方 法 有

所 不 同 , 一 般 要 进 行 下 列 步 骤 : 1.开 启 仪 器 , 清 洗 管 道 。 2. 用 适 合 本 仪 器 的 低 、高 值 斜 率 液 进 行 两 点 定 标 。 3. 间 接 电 位 法 的 样 品 由 仪 器 自 动 稀 释 后 再 行 测 定 .直 接 电 位 法 的 样 品 可 直 接 吸 入 电 极 管 道 进 行 测 定 。 4. 测 定 结 果 由 仪 器 内 微 处 理 器 计 算 后 打 印 数 值 。5.每 天 用 完 后 , 清 洗 .电 极 和 管 道 后 再 关 机 。 若 用 于 急 诊 检 验 室 , 可 不 关 机 , 自 动 定 时 清 洗 和 单 点 校 准 , 随 时 使 用 。 ③ 电 解 质 的 排 除 效 应 :是 指 电 解质从总血浆体积的固体部分中排出出来。 是说主要的的电解质基 就 本上被禁闭在水相中。 浆中总固体主要是蛋白质和脂类的体积大约 血 占 7%,而 大 约 93%的 血 浆 体 积 是 水 。在 做 间 接 ISE 测 定 之 前 ,要 将 一 定 体 积 ( 例 如 10μ L) 的 总 血 浆 进 行 稀 释 , 而 实 际 上 只 有 9.3μ L 血 浆 加 到 稀 释 液 中 。 因 此 一 份 血 浆 间 接 法 测 定 钠 浓 度 为 145mmol/L, 这 属 于 总 血 浆 体 积 中 的 钠 离 子 浓 度 ,而 不 是 血 浆 水 体 积 中 的 钠 离 子 浓 度 。如 果 该 份 血 浆 含 有 93%的 水 , 那 么 血 浆 中 钠 离 子 浓 度 应 为 156mmol/L. 在 血 浆 电 解 质 分 析 中 出 现 这 种 负 误 差 ,许 多 科 学 家 已 认 识 到 。当 血 浆 水 中电解质的浓度属于生理时, 要默认正常个体的血浆水体积非常稳 只 定, 些误差可忽视。 际上所有电解质参考区间都是基于这种假设, 这 实 反映的是总血浆体积中的浓度。 实在临床化学实验室中测定的各种 确 电 解 质 浓 度 都 是 指 总 血 浆 体 积 浓 度 ,而 不 是 指 血 浆 水 体 积 浓 度 。当 存 在 病 理 情 况 时 ,血 浆 水 体 积 改 变 了 ,例 如 高 脂 血 症 和 高 蛋 白 血 症 ,此 时 的 电 解 质 排 出 作 用 影 响 明 显 了 。在 这 种 病 理 情 况 下 ,样 品 在 分 析 前 进 行 稀 释 ,测 定 值 出 现 假 性 偏 低 。为 了 使 直 接 ISE 法 的 测 定 结 果 与 间 接 法 结 果 当 ,将 ISE 方 法 的 测 定 结 果 乘 以 0.93。直 接 测 定 结 果 要 比 间

接 法 测 定 结 果 更 具 有 生 理 意 义 。③ 氯 电 极 使 用 久 后 ,电 极 膜 头 上 会 出 现 黑 色 的 物 质 (AgCl),此 时 电 极 灵 敏 度 下 降 , 需 用 柔 软 的 布 类 将 膜 表 面黑色的物质擦去,再用细纱纸轻轻地摩擦数次即可.

9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006

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文件编号:检验科-SH-20 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 77 页 共 103 页

血清总钙测定

血清总钙测定(偶氮胂 III 法)
1.实验原理:钙 和 磷 是 人 体 内 含 量 最 多 的 电 解 质 。 成 人 体 内 钙 总 量 700 ~ 1400g, 其 中 99%以 上 以 以 羟 磷 灰 石 [3Ca(po4) 2 ca(OH) 2 ]的 形 式 构 成 骨 盐 积 存 于 骨 髓 及 牙 齿 中 。软 组 织 和 体 液 中 含 钙 量 很 少 ,但 血 液 中 的 钙 与 骨 髓 中 的 钙 维 持 动 态 平 衡 ,具 有 重 要 的 生 理 意 义 。钙 除 了 是 构成骨髓的原料外,钙离子和心肌及骨髓肌的收缩和舒张有密切关 系 。它 能 降 低 神 经 肌 肉 的 兴 奋 性 。当 血 清 钙 浓 度 降 低 时 ,神 经 肌 肉 的 兴奋性升高而出现低钙性抽搐。钙还可作为某些酶的激活剂或抑制 剂 ,参 与 多 种 酶 促 反 应 ,血 液 凝 固 过 程 就 需 要 钙 离 子 参 加 。血 液 中 的 钙离子几乎全部存在于血清中,而且含量很少。血 清中的钙分为非 扩 散 钙 和 扩 散 钙 两 大 类 。非 扩 散 钙 是 指 与 血 浆 蛋 白 结 合 的 钙 ,它 们 不 能透过毛细血管壁, 不具有生理活性。 血浆蛋白含量明显降低时, 也 当 非 扩 散 钙 减 少 , 血 清 总 钙 量 也 降 低 , 但 不 影 响 钙 离 子 浓 度 ;扩 散 钙 主 要指游离状态的钙离子, 有一小部分是与柠檬酸等小分子化合物结 也 合 成 可 溶 性 不 解 离 的 钙 盐 .只 有 钙 离 子 才 具 奋 生 理 活 性 ,虽 然 非 扩 散 钙无直接生理意义, 非扩散钙和钙离子之间可以互相转变并维持动 但 态 平 衡 .两 者 的 转 变 受 血 液 中 pH 值 的 影 响 .当 血 液 中 H+浓 度 升 高 时 , 非 扩 散 钙 解 离 趋 势 增 大 , 因 而 非 扩 散 钙 减 少 , 钙 离 子 增 多 ,反 之 , 当 血 液 中 HC03 浓 度 升 高 时 , 钙 离 子 与 血 浆 蛋 白 质 结 合 的 趋 势 增 大 , 因 此 , 钙 离 子 浓 度 降 低 , 非 扩 散 钙 浓 度 升 高 。 偶 氮 胂 III 与 钙 离 子 结 合 形 成 有 色 化 合 物 ,在 650nm 处 有 特 征 吸 收 峰 。吸 光 度 与 样 品 中 钙
-

离子浓度成正比。 2.标本采集与处理:用 血 清 或 肝 素 抗 凝 血 浆 标 本 , 不 能 用 钙 络 合 剂 作 抗 凝 剂 的 标 本 . 室 温 下 血 清 可 保 存 8 小 时 ;2 ~ 8 ℃ 下 血 清 可 保 存 24 小时. 3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 东 欧 津 玛 试 剂 公 司 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下 成 份 含 量

偶 氮 胂 III 三乙醇胺

≧100mmol/L ≧100mmol/L

3.2 仪 器 及 参 数 : 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 副波长 反应温度 660nm 750nm 37℃ 分析方法 反应方向 样 品 /试 剂 终点法 向上 3: 300

4.质量控制:在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质

控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ).在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 , 若失控,查明原因并采取措施。
5 计算方法:

样本中总钙的含量=

〓C0

△At----------标本管的吸光度变化; △As----------标准管的吸光度变化; C0-----------标准液的浓度; 6 参考区间: ⑴ 幼 儿 (不 足 1 个 月 ) 1.75 - 2. 87 mmol/L; ⑵幼儿( 1 个月至 1 岁) ⑶ 成 人 2.05 7 临床意义: 【 1】 血 钙 增 高 : 血 清 总 钙 超 过 2.58mmol/L 为 高 血 钙 症 。 ( 1) 摄 入 过 多 :静 脉 输 入 钙 过 多 、 饮 用 大 量 牛 奶 等 。 溶 骨 作 用 增 强 : ① 原 发 性 甲 状 旁 腺 功 能 亢 进 症 ;② 伴 有 血 清 蛋 白 质 增 高 的 疾 病 , 如 多 发 性 骨 髓 瘤 、骨 肉 瘤 等 ;③ 急 性 骨 萎 缩 折 后 和 肢 体 麻 痹 ;④ 肿 瘤 ,如 分 泌 前 列 腺 素 的 的 肾 癌 、 肺 癌 ;分 泌 破 骨 细 胞 刺 激 因 子 的 急 性 白 血 病 、 多 发 性 骨 髓 瘤 、 淋 巴 瘤 等 。 钙 吸 收 增 加 :大 量 应 用 维 生 素 D、 溃 疡 病 长期应用碱性药物治疗等 . (4)肾 功 能 损 害 :急 性 肾 功 能 不 全 时 , 钙 排 出 减 少 。 【 2】血 钙 减 低 :血 清 总 钙 低 于 2.25mmol/L 称 为 低 血 钙 症 。摄 入 不 足 及 吸 收 不 良 ;长 期 低 钙 饮 食 、乳 糜 泻 或 小 肠 吸 收 不 良 综 合 征 、阻 塞 性 黄疸等,可因钙及维生素 D 吸收障碍,使血钙减低等。 成骨作用增 强 :甲 状 旁 腺 功 能 减 退 症 、恶 性 肿 瘤 骨 转 移 。 吸 收 减 少 ;佝 偻 病 、婴 儿 手 足 抽 搦 症 、骨 质 软 化 症 等 .肾 脏 疾 病 :急 性 和 慢 性 肾 功 能 不 全 、肾 性伺倭病、肾病综合征、肾小管性酸中毒等. (5)其 他 :急 性 坏 死 性 胰 腺 炎 ,因 血 钙 与 FFA 结 合 形 成 皂 化 物 ,使 血 钙 2.15 - 2.79 mmol/L;

-2.54 mmol/L;

减 低 。妊 娠 后 期 及 哺 乳 期 需 要 钙 量 增 加 ,若 补 充 不 足 时 ,使 血 钙 减 低 。 8.附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 :胆 红 素 ≤ 60mg/dl, 血 红 蛋 白 ≤ 200mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl,cu 2 + ,Fe 2 + ,Zn 2 + 分 别 达 到 2.0mmol/l,Mg 2 + 10mmol/l 时 ,对 测 定值几乎没有影响。 ⑵ 方 法 局 限 性 :本 试 剂 的 线 性 范 围 可 达 5.0mmol/L ,如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 进 行 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘以稀释的倍数。 ⑶ 危 急 值 报 告 : Ca 2 + <1.75mmol/L 或 >3.50mmol/L 。 ⑷注意事项: ①血清陈旧,溶血、严重黄疸及重度乳糜血可使检测 结 果 出 现 偏 差 。② 试 剂 在 546nm 波 长 下 空 白 吸 光 度 应 ≤ 0.500,否 则 则 应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 .③ 当 采 用 2.5mmol/L 的 浓 度 标 准 液 时 , 吸 光 度 值 应 为 ≧ 0.070。 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006.

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文件编号:检验科-SH-21 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 83 页 共 103 页

血清无机磷测定

血清无机磷测定(磷钼酸紫外法)
1. 实 验 原 理 磷 在 体 内 主 要 存 在 于 骨 髓 中 (70% -80%) , 其 余 在 软 组

织 、细 胞 内 ,只 有 少 部 分 存 在 于 体 液 中 。体 内 许 多 重 要 的 物 质 如 某 些 蛋 白 质 、脂 类 化 合 物 、核 酸 、辅 酶 等 都 含 有 磷 ,但 血 液 中 磷 与 骨 髓 中 的 磷 维 持 动 态 平 衡 ,具 有 重 要 的 生 理 意 义 。血 液 中 的 磷 以 有 机 磷 和 无 机 磷 两 种 形 式 存 在 ,血 磷 通 常 指 血 浆 中 的 无 机 磷 。血 磷 和 血 钙 之 间 有 一 定 的 浓 度 关 系 ,正 常 人 钙 、磷 浓 度 (mg/L) 的 乘 积 为 36-40。饮 食 中

的 磷 经 小 肠 吸 收 ,而 肾 脏 则 是 排 磷 的 主 要 器 官 ,62%-80% 的 磷 经 肾 脏 随尿排出。 在酸性条件下,无机磷与钼酸铵反应生成磷钼酸复合物,在 340nm 检 测 其 吸 光 度 的 变 化 , 与 标 准 比 较 计 算 标 本 中 无 机 磷 的 浓 度 。 2.标本采集与处理: 血 清 及 肝 素 抗 凝 的 血 浆 。不 要 使 用 氟 化 纳 作 为 抗 凝 剂。标本 采 集 后 尽 快 分 离 血 清 ,因 为 红 细 胞 中 含 有 不 稳 定 的 有 机 磷 化 合 物 ,它 的 水 解 可 引 起 错 误 的 高 值 。 血 清 及 血 浆 标 本 在 2 -8℃ 保 存 时 可 稳 定 1 周。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 东 欧 津 玛 试 剂 公 司 检 测 试 剂 盒 。 其 试 剂 组 成 如 下 成 份 含 量

偶 氮 胂 III 三乙醇胺

≧100mmol/L ≧100mmol/L

3.2 仪 器 及 参 数 : 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 副波长 反应温度 660nm 750nm 37℃ 分析方法 反应方向 样 品 /试 剂 终点法 向上 3: 300

4.质量控制:在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质

控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 ,3S 为 失 控 限 ,绘 制 质 控 图 ,判 断 是 否 在 控 ( 质 控 规 则 见 生 化 室 室 内 质 控 操 作 规 程 ).在 控 后 方 可 进 行 标 本 测 定 , 若失控,查明原因并采取措施。
5. 计算方法:

样本中总钙的含量=

〓C0

△At----------标本管的吸光度变化; △As----------标准管的吸光度变化; C0-----------标准液的浓度; 6 7 参考区间: 成 0.87-1.45 mmol/L; 临床意义:

A.血 磷 增 高 (1)内 分 泌 疾 病 :原 发 性 或 继 发 性 甲 状 旁 腺 功 能 减 退 。 (2)排 出 障 碍 :慢 性 肾 功 能 不 全 (高 磷 、 低 钙 )。 (3)维 生 素 D 摄 取 过 量 , 可 促 进 肠 道 吸 收 钙 、 磷 , 导 致 血 清 钙 、 磷 增 高。 (4)其 他 :多 发 性 骨 髓 瘤 , 骨 折 愈 合 期 (高 磷 、 高 钙 )。 B. 血 磷 减 低 (1)摄 人 不 足 或 吸 收 障 碍 :饥 饿 、恶 病 质 、吸 收 不 良 、活 性 维 生 素 D 缺 乏、长期应用含铅制剂等。 (2) 丢 失 过 多 :大 量 呕 吐 、 泻 、 液 透 析 、 小 管 性 酸 中 毒 、 腹 血 肾 Fanconi 综 合 征 (肾 小 管 重 吸 收 磷 障 碍 )、 应 用 噻 嗪 类 利 尿 剂 等 。 (3 )转 入 细 胞 内 :静 脉 注 射 胰 岛 素 或 葡 萄 糖 、 过 度 换 气 综 合 征 、 碱 中

毒、急性心肌梗死等。 (4)其 他 :乙 醇 中 毒 、糖 尿 病 酮 症 酸 中 毒 、甲 状 旁 腺 功 能 亢 进 症 、维 生 素 D 抵抗性佝倭病等。 8.附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 :胆 红 素 ≤ 60mg/dl, 血 红 蛋 白 ≤ 200mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl,cu 2 + ,Fe 2 + ,Zn 2 + 分 别 达 到 2.0mmol/l,Mg 2 + 10mmol/l 时 ,对 测 定值几乎没有影响。 ⑵ 方 法 局 限 性 :本 试 剂 的 线 性 范 围 可 达 5.0mmol/L ,如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 进 行 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘以稀释的倍数。 ⑶ 危 急 值 报 告 : Ca 2 + <1.75mmol/L 或 >3.50mmol/L 。 ⑷注意事项: ①血清陈旧,溶血、严重黄疸及重度乳糜血可使检测 结 果 出 现 偏 差 。② 试 剂 在 546nm 波 长 下 空 白 吸 光 度 应 ≤ 0.500,否 则 则 应 视 为 过 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 .③ 当 采 用 2.5mmol/L 的 浓 度 标 准 液 时 , 吸 光 度 值 应 为 ≧ 0.070。 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006. 9.2 梁 淑 新 、 俊 英 .临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 施 军 事 医 学 出 版 社 , 2006.

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文件编号:检验科-SH-21 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 81 页 共 103 页

淀粉酶测定

淀 粉 酶 测 定 ( EPS-PNP-G 7 底 物 法 法 )
1.实 验 原 理 : 淀 粉 酶 主 要 来 自 胰 腺 , 其 次 是 腮 腺 , 此 外 肝 、 小 肠 、 肾 、卵 巢 、皮 下 脂 肪 等 也 能 产 生 少 量 淀 粉 酶 。淀 粉 酶 是 一 种 重 要 的 水 解 酶 , 能 水 解 淀 粉 产 生 双 糖 和 单 糖 , 分 为 α 、 β两 类 。 胰 淀 粉 酶 系 α -淀 粉 酶 , 分 子 量 45000 , 不 需 激 活 就 有 活 性 , 当 胰 腺 疾 病 尤 其 是 急 性胰腺炎发生时, 胰管管壁及膜泡中逸出的胰淀粉酶可直接消化胰 从 腺 组 织 。漏 出 的 胰 液 被 吸 收 入 血 而 随 尿 中 排 出 。故 血 、尿 淀 粉 酶 均 可 升高,对其进行测定,是临床上诊断胰腺疾病常用的方法。 采 用 4 , 6- 亚 乙 基 - 对 硝 基 苯 -α -D- 麦 芽 七 糖 苷 (EPS-PNP-G 7 ) 底 物 :EPS-P-G 7 经 淀 粉 酶 水 解 , 后 以 α -葡 萄 糖 苷 酶 为 辅 助 酶 水 解 中 间 然 产 物 释 放 出 对 硝 基 酚 , 从 而 引 起 405nm 处 吸 光 度 的 上 升 , 此 种 变 化 与 样 本 中 的 α -淀 粉 酶 活 性 成 正 比 。 5E-G 7 -PNP+5H 2 O E-G 3 +G 4 -PNP+2E-G 4 +2G 3 -PNP+2E-G 5 +2G 2 -PNP AMY

G 4 -PNP+2G 3 -PNP+2G 2 -PNP+14H 2 O

多功能葡萄糖苷酶

14G +

5PNP 2.标 本 采 集 与 处 理 :3 天 内 的 活 性 损 失 :2~ 8℃ 保 存 :<8%;15~ 25℃ 保 存 :<10%;标 本 稳 定 性 :-20℃ 保 存 至 少 可 稳 定 3 个 月 .尿 液 采 集 随 机尿,立即送往实验室进行测定。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 温 州 东 瓯 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下









R1:Good's 缓 冲 液 多功能葡萄糖苷酶 NaCL MgCL 2 R2: EPS-PNP-G 7

≧ 50mmol/L ≧ 10KU/L ≧ 50mmol/L ≧ 10mmol/L ≧ 2mmol/L

3.2 仪 器 及 参 数 : 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 :

主波长 副波长 反应温度

405nm 520nm 37℃

分析方法 反应方向 S:R1:R2

速率法 向上 6:225: 75

延滞时间 读数时间 理论因子

60S 120S 4875

4. 质 量 控 制 : 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 , 3S 为 失 控 限 , 绘 制 质 控 图 , 判 断 是 否在控(质控规则见生化室室内质控操作规程) 在控后方可进行标 。 本测定,若失控,查明原因并采取措施。
5.计 算 方 法 : AMY(U/L)

=

ΔA/min×Vt×1000

=ΔA/min×F

式中: ΔA/min 一一每分钟吸光度变化率; e 一一 9.5 摩尔吸光系数; Vt 一一反应液总体积 (ml); Vs 一一样品体积 (ml); d 一一 比色杯光径 (cm) F 一一 理论因子 6.参 考 值 范 围 : 血 清 < 96U/L 尿 液 < 400U/L 7 临 床 意 义 : (1)急 性 胰 腺 炎 :胰 腺 疾 病 时 ,胰 腺 分 泌 的 淀 粉 酶 逸 入 血

中 而 使 血 中 含 量 升 高 ,常 于 起 病 后 6 -12 小 时 即 开 始 开 高 , 3 -5 天 后 恢 复 正 常 。因 淀 粉 酶 分 子 量 较 小 约 45000 左 右 ,故 可 被 肾 小 球 滤 过 而 出 现 在 尿 中 。 淀 粉 酶 在 发 病 后 12 -24 小 时 也 会 升 高 , 下 降 尿 但

缓 慢 , 尿 淀 粉 酶 升 高 持 续 7 -10 天 。 (2) 慢 性 胰 腺 炎 :轻 、 中 度 升 高,其诊断意义不大。 (3 )胰 腺 癌 :常 于 癌 症 的 早 期 升 高 。 因 为 :① 肿 瘤 压 迫 造 成 胰 腺 导 管 阻 塞 ,并 使 其 压 力 增 高 ,使 AMS 逸 入 血 中 ;② 短 时 间 内 大 量 胰 腺 组 织 破 坏 , 组 织 中 的 AMS 进 入 血 中 。 (4) 胰 腺 囊 肿 。 (5) 其 他 胰 腺 疾 病 。 8. 附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 : ① 当 标 本 中 胆 红 素 ≤ 50mg/dl , 血 红 蛋 白 ≤ 250mg/dl, 抗 坏 血 酸 ≤ 50mg/dl,三 酰 甘 油 <25mmol/L 时 对 检 测 结 果 没 有 影 响 。 ② 不 能 用 EDTA, 草 酸 盐 等 作 抗 凝 剂 , 因 为 这 些 抗 凝 剂 可 能 通 过 耦 合 AMY 所 需 要 的 Ca 2 + ,CL - 等 离 子 而 抑 制 AMY 的 活 性 。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 1000U/L, 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘 以 稀释倍数。 ⑶危急值报告:无危急值。 ⑷注意事项: ①急性胰腺炎病情的严重程度与淀粉酶的升高并 不一致:轻度病人可以升高,而重症患者反而可以正常,甚至降低。 因 此 ,血 尿 淀 粉 酶 正 常 并 不 能 完 全 排 除 急 性 胰 腺 炎 。 ② 血 尿 淀 粉 酶 的活性并不一定平行。 急性胰腺炎时,血淀粉酶升高较快,出现高 峰 时 间 较 尿 淀 粉 酶 早 ,不 过 后 者 的 持 续 时 间 较 长 ,故 两 者 都 应 进 行 检 测比较 。③当怀疑急性胰腺炎时,应及时捡测淀粉酶尤其是血淀粉

酶,因其常随病程延长而降低从而影响检测结果,不过早于 6 小时 的检测可能会因淀粉酶还未升高而只能得到正常结果已故反复检测 并结合其他检查结果及临床表现综合分析是很有必要的, 淀粉酶检 因 测本身缺乏特异性 。④急性胰腺炎后血淀粉酶长期升高应考虑炎症 持 续 存 在 或 有 假 性 囊 肿 等 并 发 症 的 可 能 。⑤ 测 定 淀 粉 酶 的 同 时 测 定 其 同工酶,对胰腺炎或其他引起 血、尿淀粉酶增高的疾病的诊断更有 意义。 ⑥由于淀粉酶的特殊性,迄今它的测定方法难以标准化,不 仅 各 类 测 定 方 法 因 反 应 的 原 理 不 一 ,底 物 不 同 ,产 物 也 不 同 而 难 以 统 一,即使是反应原理相似的同类测定方法,结果也往往不一致, 而 且 与 理 论 计 算 不 一 定 相 符 。 试 剂 空 白 吸 光 度 大 于 0.50 时 ,应 视 为 过 ⑦ 期 试 剂 ,不 能 再 使 用 .⑧ 每 分 钟 空 白 吸 光 度 变 化 Δ A/min≤ 0.01. 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006。 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 军 事 医 学 出 版 社 , 2006。

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文件编号:检验科-SH-22

版本/修订号:1/0 主题内容

抗 链 球 菌 溶 血 素“ O”测 定

生效日期:2011-5-20 第 85 页 共 103 页

抗 链 球 菌 溶 血 素 “ O” 测 定 ( 胶 乳 增 强 免 疫 透 射 比 浊 法)
1实验原理:链 球 菌 溶 血 素“ O”是 A 群 溶 血 性 链 球 菌 代 谢 产 物 之 一 ,它 可 以 溶 解 红 细 胞 ,溶 血 素 具 有 抗 原 性 ,能 剌 激 机 体 产 生 抗 链 球 菌 溶 血 素 抗 体 (ASO), 其 测 定 可 证 明 近 期 有 无 溶 血 性 链 球 菌 的 感 染 。 本 试 剂 以 独 特 的 技 术 将 抗 原( 链 球 菌 溶 血 素“ O” )描 定 在 胶 乳 表 面 上 。血 清 中 的 ASO 与 试 剂 中 的 抗 原 在 液 相 中 结 合 成 抗 原 抗 体 复 合 物 , 生 浊 度 产 变 化 ,胶 乳 试 剂 可 以 独 特 的 增 大 浊 度 的 变 化 ,增 大 试 剂 的 灵 敏 度 。该 浊 度 变 化 的 高 低 与 样 本 中 ASO 的 含 量 成 正 比 。测 定 该 浊 度 ,与 校 准 品 比 较 , 即 能 得 出 样 品 中 血 清 的 ASO 含 量 。 2.标 本 采 集 与 处 理 :新 鲜 标 本 血 清 ,如 当 天 采 集 标 本 不 能 及 时 测 定 请 保存于 -20℃ , 临 用 前 37℃ 快 速 解 冻 。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 上 海 捷 门 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下









R1:PBS 缓 冲 液 PEG

R2:抗 原 致 敏 胶 乳 稳定剂、表面活性剂

3.2 仪 器 及 参 数 : 3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 副波长 反应温度 37℃ 600nm 分析方法 反应方向 S:R1:R2 多点定标 向上 6:280:70

4. 质 量 控 制 : 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 , 3S 为 失 控 限 , 绘 制 质 控 图 , 判 断 是 否在控(质控规则见生化室室内质控操作规程) 在控后方可进行标 。 本测定,若失控,查明原因并采取措施。
5.计 算 方 法 : 用 多 点 定 标 法 , 用 非 线 性 计 算 模 型 如 Logit、 采 采 Cubic、

Spline 等 计 算 模 式 , 一 般 全 自 动 生 化 分 析 仪 可 自 动 计 算 出 结 果 。 6.参 考 值 范 围 : 0~ 200IU/L 7 临床意义: (1)溶 血 性 链 球 菌 感 染 1 周 后 , 链 球 菌 "0" 效 价 即 开 始 上 升 , 抗 4 -6 周 达 高 峰 , 由 于 本 菌 感 染 后 其 血 清 中 的 抗 "0" 抗 体 可 持 续 数 月 甚 至 几 年 ,故 一 次 测 定 结 果 增 高 不 一 定 就 是 近 期 感 染 的 指 征 ,应 多 次 动 态 观 察 , 并 结 合 临 床 作 全 面 分 析 , 怀 疑 风 湿 活 动 而 抗 "0"多 次 正 常,有助于排除本病。 (2)急 性 肾 小 球 肾 炎 , ASO 可 增 高 。 (3)风 湿 性 心 肌 炎 、 心 包 炎 , 风 湿 性 关 节 炎 也 增 高 。

(4) 急 性 咽 炎 、 扁 桃 体 炎 等 上 呼 吸 道 感 染 增 高 。 (5)在 某 些 与 溶 血 性 链 球 菌 感 染 无 明 显 关 系 的 疾 病 如 肝 炎 、 肾 病 综合征、过敏性紫癜等也可见非特异性增高。 8. 附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 : 当 血 清 中 含 有 大 IgM(IgM>10g/L, 如 巨 球 蛋 白 血 症 血 清 ), 可 能 影 响 检 测 结 果 。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 600IU/L, 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘 以 稀释倍数。 ⑶危急值报告:无危急值。 ⑷注意事项: ①请遵循样品与试剂的比例, 品量过大将影响标 样 准 曲 线 ② 本 品 为 比 浊 法 试 剂 ,不 建 议 采 取 副 波 长 。③ 对 ASO 检 测 时 , 在 设 臵 参 数 时 ,有 些 生 化 仪 也 可 以 设 成 速 率 法 ,可 避 免 高 值 出 现 时 要 稀释的现象。 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006。 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 军 事 医 学 出 版 社 , 2006。

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文件编号:检验科-SH-23 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 88 页 共 103 页

类风湿因子测定

类风湿因子测定(胶乳增强免疫透射比浊法)
1实验原理:类 风 湿 因 子 (RF)是 抗 人 体 IgG(免 疫 球 蛋 白 G)分 子 Fc 片 段 上 抗 原 决 定 簇 的 特 异 抗 体 , 为 抗 与 IgG 的 自 身 抗 体 , 与 变 性 IgG、 热 聚 合 IgG 都 具 有 较 强 的 亲 和 力 , 主 要 为 19S 的 与 IgM.也 可 见 7S 的 IgG 及 Ig A.可 分 为 IgM -RF、 IgG-RF 和 IgA-RF 等 .一 般 说 的 RF 是 指 IgM-RF。 同 时 存 在 两 种 类 型 RF , 仅 见 于 反 应 性 关 节 炎 (RA)。 如 -般 高 滴 度 的 与 IgA-RF 常 与 关 节 外 表 现 有 关 。 类 风 湿 因 子 能 与 人 或 动 物 的 变 性 与 IgG 结 合 ,而 不 与 正 常 与 IgG 发 生 凝 集 反 应 。血 清 中 的 RF 与 试 剂 中 的 抗 原 在 液 相 中 结 合 成 抗 原 抗 体 复 合 物 ,产 生 浊 度 变 化 ,胶 乳 试 剂 可 以 独 特 的 增 大 浊 度 的 变 化 ,增 大 试 剂 的 灵 敏 度 。该 浊 度 变 化

的 高 低 与 样 本 中 RF 的 含 量 成 正 比 。 测 定 该 浊 度 , 与 校 准 品 比 较 , 即 能 得 出 样 品 中 血 清 的 RF 的 含 量 。 2.标 本 采 集 与 处 理 :新 鲜 标 本 血 清 ,如 当 天 采 集 标 本 不 能 及 时 测 定 请 保存于 -20℃ , 临 用 前 37℃ 快 速 解 冻 。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 上 海 捷 门 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下









R1:PBS 缓 冲 液 PEG 3.2 仪 器 及 参 数 :

R2:抗 原 致 敏 胶 乳 稳定剂、表面活性剂

3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 副波长 反应温度 37℃ 600nm 分析方法 反应方向 S:R1:R2 多点定标 向上 5:280:70

4. 质 量 控 制 : 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 , 3S 为 失 控 限 , 绘 制 质 控 图 , 判 断 是 否在控(质控规则见生化室室内质控操作规程) 在控后方可进行标 。 本测定,若失控,查明原因并采取措施。
5.计 算 方 法 : 用 多 点 定 标 法 , 用 非 线 性 计 算 模 型 如 Logit、 采 采 Cubic、

Spline 等 计 算 模 式 , 一 般 全 自 动 生 化 分 析 仪 可 自 动 计 算 出 结 果 。 6.参 考 值 范 围 : 0~ 20IU/L 7 临床意义:
⑴70%~ 90%的 RA 患 者 RF 阳 性 。因 此 ,RF 测 定 是 美 国 风 湿 病 学 会 1987

年 类 风 湿 关 节 炎 诊 断 标 准 之 一 , 但 RF 阴 性 不 能 排 除 RA 诊 断 。
⑵ 除 RA 外 , 还 有 其 他 很 多 疾 病 RF 亦 可 阳 性 , 如 干 燥 综 合 征 , 混 合

型结 缔 组织 病,2 型 混合 型 冷球 蛋 白症 ,慢 性活 动 性肝 炎 、亚 急性 细 菌 性 心 内 膜 炎 ,全 身 性 红 斑 狼 疮 ,多 种 细 菌 、真 菌 、病 毒 感 染 。因 此 RF 阳 性 时 应 综 合 临 床 全 面 检 查 , 对 其 意 义 作 出 综 合 分 析 。
⑶ 未 经 治 疗 的 类 风 湿 关 节 炎 患 者 阳 性 率 达 80% , 且 滴 度 在 1: 160

以上。进行动态观察可作为病变活动及药物治疗后疗效评价。
⑷ 其 他 自 身 免 疫 性 疾 病 如 SLE 阳 性 率 为 20%-25% 岛 ,硬 皮 病 、皮 肌

炎 阳 性 率 为 10% -24% , 滴 度 低 。 ⑸ 健 康 人 群 中 约 有 5% 的 人 RF 阳 性 , 70 岁 以 上 的 人 阳 性 甚 至 高 达 10%-25%,但 临 床 意 义 不 太 明 确 。 有 人 认 为 , RF 阳 性 常 早 于 临 床 症 状 许 多 年 , 这 些 人 患 RA 的 风 险 较 RF 阴 性 的 人 要 高 5~ 40 倍 。 8. 附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 : 当 血 清 中 含 有 大 IgM(IgM>10g/L, 如 巨 球 蛋 白 血 症 血 清 ), 可 能 影 响 检 测 结 果 。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 80IU/L , 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘 以 稀释倍数。

⑶危急值报告:无危急值。 ⑷注意事项: ①请遵循样品与试剂的比例, 品量过大将影响标 样 准 曲 线 ② 本 品 为 比 浊 法 试 剂 , 不 建 议 采 取 副 波 长 。 ③ 对 RF 检 测 时 , 在 设 臵 参 数 时 ,有 些 生 化 仪 也 可 以 设 成 速 率 法 ,可 避 免 高 值 出 现 时 要 稀释的现象。 9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006。 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 军 事 医 学 出 版 社 , 2006。

郧县中医院检验科 主题内容

生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-24 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 91 页 共 103 页

C 反应蛋白测定

C 反应蛋白测定(胶乳增强免疫透射比浊法)

1实验原理:1930 年 首 次 在 急 性 大 叶 性 肺 炎 患 者 的 血 清 中 发 现 一 种 能 在 Ca2+存 在 时 与 肺 炎 球 菌 细 胞 壁 中 的 荚 膜 多 糖 形 成 复 合 物 ( C多 糖 ) 的 物 质 , 名 为 C反 应 素 。 命 1941 年 测 知 它 是 一 种 蛋 白 质 , 称 为 C 反 故 应 蛋 白 ,CRP 可 与 许 许 多 细 菌 、真 菌 、寄 生 虫 的 细 胞 膜 磷 酰 胆 碱 结 合 。 CRP 是 机 体 的 一 种 重 要 急 性 期 蛋 白 ,由 肝 脏 合 成 并 释 放 人 血 。由 相 对 分 分 子 质 量 23017 的 5 个 亚 单 位 组 成 , 每 个 亚 单 位 有 206 个 氨 基 酸 残 基 。 整 的 CRP 是 一 种 环 状 结 构 的 五 聚 体 这 种 特 征 性 的 结 构 使 其 归 于 完 五 聚 素 (一 组 具 有 免 疫 防 御 特 性 的 钙 结 合 蛋 白 )家 族 。 急 性 期 反 应 时 在 肝 细 胞 在 IL-6等 细 胞 因 子 诱 到 下 大 量 合 成 CRP.正 常 情 况 下 每 天 合 成 I g, 外 科 损 伤 .患 者 血 中 CRP 水 平 8 -10 h 可 增 家 1倍 。 CRP 半 哀 期 为 19h.CRP 的 主 要 生 物 学 功 能 是 通 过 与 配 体 ( 凋 亡 与 坏 死 的 细 胞 或 入 侵 的 细 菌 、真 菌 、寄 生 虫 等 的 磷 酰 胆 碱 )结 合 ,激 活 补 体 和 单 核 吞 噬 细 胞 系 统 , 将 载 有 配 体 的 病 理 物 质 或 病 原 体 清 除 。 血 清 中 的 CRP与 试 剂 中 的 抗 体 在 液 相 中 结 合 成 抗 原 抗 体 复 合 物 ,产 生 浊 度 变 化 ,胶 乳 试 剂 可 以 独 特 的 增 大 浊 度 的 变 化 ,增 大 试 剂 的 灵 敏 度 。该 浊 度 变 化 的 高 低 与 样 本 中 RF的 含 量 成 正 比 。测 定 该 浊 度 ,与 校 准 品 比 较 ,即 能 得 出 样 品 中 血 清 的 CRP的 含 量 。 2.标 本 采 集 与 处 理 :新 鲜 标 本 血 清 ,如 当 天 采 集 标 本 不 能 及 时 测 定 请 保存于 -20℃ , 临 用 前 37℃ 快 速 解 冻 。 3.实 验 试 剂 及 仪 器 : 3.1 试 剂 : 使 用 上 海 捷 门 检 测 试 剂 盒 。 试 剂 组 成 如 下









R1:PBS 缓 冲 液 PEG 3.2 仪 器 及 参 数 :

R2:抗 原 致 敏 胶 乳 稳定剂、表面活性剂

3.2.1 使 用 凯 美 雅 生 化 分 析 仪 ,具 体 的 操 作 详 见 生 化 分 析 仪 作 业 指 导 书. 3.2.2 分 析 参 数 : 主波长 副波长 反应温度 37℃ 600nm 分析方法 反应方向 S:R1:R2 多点定标 向上 5:280:70

4. 质 量 控 制 : 在 测 定 每 一 批 标 本 前 先 做 正 常 值 和 异 常 值 来 两 个 水 平 的 质 控 品 , 以 2S 为 质 控 警 告 限 , 3S 为 失 控 限 , 绘 制 质 控 图 , 判 断 是 否在控(质控规则见生化室室内质控操作规程) 在控后方可进行标 。 本测定,若失控,查明原因并采取措施。
5.计 算 方 法 : 用 多 点 定 标 法 , 用 非 线 性 计 算 模 型 如 Logit、 采 采 Cubic、

Spline 等 计 算 模 式 , 一 般 全 自 动 生 化 分 析 仪 可 自 动 计 算 出 结 果 。 6.参 考 值 范 围 : 0~ 20IU/L 7 临床意义: A:作 为 急 性 炎 症 的 指 标 , 在 临 床 上 主 要 用 于 : (1)急 住 发 热 患 者 是 病 毒 性 感 染 , 还 是 细 菌 性 感 染 的 鉴 别 诊 断 , 细 菌 性 CRP 增 加 明 显 。 (2) 风 湿 病 病 情 转 归 和 治 疗 效 果 评 估 的 检 测 ( 与 ESR 有 相 同 意

义 , 但 优 于 ESR) 。 风 湿 热 活 动 期 CRP 明 显 升 高 , 可 达 200 mglL 以 上 , 当 治 疗 好 转 后 , CRP 逐 渐 降 至 正 常 。 (3)外 科 手 术 后 有 元 感 染 的 指 标 。 (4) 白 血 病 、 系 统 性 红 斑 狼 疮 合 并 感 染 的 参 考 指 标 。 上 述 情 况 , 采 用 CRP 测 定 试 剂 盒 。 2. 作 为 冠 状 动 脉 硬 化 心 脏 病 , 特 别 是 预 示 急 性 冠 脉 综 合 征 的 一 项 指 标 , 主 要 用 于 冠 心 病 随 访 的 观 察 、 监 测 和 研 究 。 但 需 采 用 HCRP( 超 敏 CRP) 测 定 试 剂 盒 。

8. 附 注 : ⑴ 干 扰 因 素 : 当 血 清 中 含 有 大 IgM(IgM>10g/L, 如 巨 球 蛋 白 血 症 血 清 ), 可 能 影 响 检 测 结 果 。 ⑵ 方 法 局 限 性 : 本 试 剂 线 性 上 限 为 80IU/L , 如 样 品 测 定 值 超 过 上 限 时 , 应 将 样 品 用 0.9% 氯 化 钠 溶 液 作 稀 释 , 重 新 测 定 , 结 果 乘 以 稀释倍数。 ⑶危急值报告:无危急值。 ⑷注意事项: ①请遵循样品与试剂的比例, 品量过大将影响标 样 准 曲 线 ② 本 品 为 比 浊 法 试 剂 , 不 建 议 采 取 副 波 长 。 ③ 对 RF 检 测 时 , 在 设 臵 参 数 时 ,有 些 生 化 仪 也 可 以 设 成 速 率 法 ,可 避 免 高 值 出 现 时 要 稀 释 的 现 象 。④ 脂 血 标 本 ,含 类 风 湿 因 子 和 人 抗 鼠 IgG 抗 体 的 标 本 都 会使结果假性升高。

9.参 考 文 献 : 9.1 叶 应 妩 、 王 毓 三 、 申 子 瑜 等 .全 国 临 床 检 验 操 作 规 程 【 第 三 版 】 东 南 大 学 出 版 社 , 2006。 9.2 梁 淑 新 、 施 俊 英 . 临 床 检 验 操 作 技 术 系 列 丛 书 生 物 化 学 检 验 分 册 , 军 事 医 学 出 版 社 , 2006。

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生化室作业指导书

文件编号:检验科-SH-24 版本/修订号:1/0 生效日期:2011-5-20 第 94 页 共 103 页

主题内容 生 化 室 室 内 质 量 控 制 操 作 规 程

生化室室内质量控制操作规程
室 内 质 量 控 制 (下 简 称 “ 室 内 质 控 ")是 实 验 室 质 量 保 证 体 系 中 的 重要组成成部分, 目的是为了保证每个患者样本测定结果的可靠性 其 包 括 两 方 面 的 含 义 ,一 是 精 密 度 高 ,即 测 定 结 果 的 重 复 性 好 ,实 验 室 每天结果变化很小, 主要消除或减小随机误差造成的影响,这主要 , 靠 建 立 健 全 的 室 内 质 控 系 统 来 保 障 ;另 一 个 方 面 是 准 确 度 高 , 即 测 定 结 果 正 确 ,接 近 真 值 ,主 要 消 除 或 减 小 系 统 误 差 的 影 响 ,这 可 以 通 过 选 用 好 的 测 定 方 法 、进 行 正 确 校 准 及 参 加 室 间 质 评 活 动 来 保 证 。以 上 两点并不是孤立的, 密是准确度的基础, 有高精密度的测定结果, 精 没 就 没 有 准 确 度 的 保 证 。因 此 ,实 验 室 要 获 得 可 靠 的 结 果 ,就 必 须 建 立 一套健全的室内质控系统。室内质控的目的是监测测定过程是否稳 定 。 早 期 实 验 室 一 般 使 用 L-G 质 控 图 。 现 在 大 多 数 实 验 室 多 采 用 Westgard多 规 则 质 控 图 , 已 成 为 临 床 实 验 室 室 内 质 控 的 主 要 方 法 。 一:室内质控的准备工作

1.人 员 培 训

实验室每个工作人员都应对开展质量控制工作的重

要 性 、基 础 知 识 、一 般 方 法 有 充 分 地 了 解 ,并 在 实 践 过 程 中 不 断 学 习 、 提高。每个实验室都应培养一批开展质控工作的技术骨干。 2. 建 立 标 准 化 操 作 规 程 标准化操作规程包括仪器使用及维护的

操 作 规 程 ,试 剂 、质 控 品 、标 准 品 等 使 用 的 规 程 和 每 个 检 验 项 目 的 操 作规程等。 3. 仪 器 的 检 定 与 校 准 对本实验室的相关仪器如分光光度计、量

具、 动生化分析仪以及其他测定仪器等要定期按要求进行检定和校 自 准 ,如 对 自 动 化 分 析 仪 、分 光 光 度 计 的 摩 尔 吸 收 系 数 ε 的 定 期 校 准 。 所有校准和检定都应有时间、结果、变更和频度的记录和说明。 4. 质 控 品 为质控目的而制备的标本称为质控品。 控品含有与测 质

定标本同样的基础物质,其分析物应具有参考值、病理值和 医学决 定 水 平 三 种 水 平 被 度 。 (1)质 控 品 的 种 类 ① 根 据 质 控 品 的 物 理 性 状 不 同 分 为 冻 干 质 控 品 、 液 体 质 控 品 和 混 合 血 清 等 ;② 根 据 有 无 测 定 值 可分为定值质控品和非定值质控品。 实验室可根据各自的情况选用 各 以上一种质控品作为室内质控品。 (2) 质 控 品 应 具 有 的 特 征 :① 人 血 清 基 质 , 分 布 均 匀 :② 无 传 染 性 ;③ 添 加 剂 和 调 制 物 的 数 量 少 且 尽 可 能 纯 ;④ 瓶 间 CV% 酶 类 应 小 于 2% 其 他 应 小 于 1% ⑤ 冻 干 品 复 禧 后 稳 定 , 2 - 8℃ 时 不 少 于 24小 时 , -2O℃ 时 不 少 于 20天 :某 些 不 稳 定 成 分 (如 BIL 且 ,ALP 等 )在 复 溶 后 4小 时 的 变 异 系 数 应 小 于 2%;⑥ 在 实 验 室 的 有 效 期 应 在 1 年 以 上 ;⑦ 合 理 的 成 本。

(3) 质 控 品 的 正 确 使 用 和 保 存 :① 严 格 按 质 控 品 说 明 书 操 作 . ② 冻 干 质 控 品 的 复 溶 要 确 保 溶 剂 的 质 量 :③ 冻 干 质 控 品 复 榕 所 加 溶 剂 的 量 要 准 确 一 致 . ④ 冻 干 质 控 品 复 溶 应 轻 轻 摇 匀 切 忌 剧 烈 震 摇 ;质 控 品 应 按 规 定 方 法 保 存 , 用 超 期 品 :⑥ 质 控 品 要 与 标 本 同 样 测 定 条 件 下 测 定 。 不 (4)室 内 质 控 品 推 度 水 平 :在 选 择 质 控 品 浓 度 水 平 这 个 问 题 上 , 议 三 建 级 医 院 的 临 床 实 验 室 , 量 测 定 每 批 (不 超 过 24小 时 )至 少 使 用 两 个 浓 定 度 水 平 的 质 控 品 。 二 级 、 一 级 医 院 临 床 实 验 室 , 定 量 测 定 每 批 (不 超 过 24小 时 )至 少 使 用 一 个 被 度 水 平 (医 学 决 定 性 水 平 )的 质 控 品 . 二.室内质控的实际操作 1.设 定 靶 值 (1)稳 定 性 较 长 的 质 控 品 :在 开 始 室 内 质 控 时 , 先 要 设 定 首 质 控品的靶值。各实验室应对新批号的质控品的各个测定项目自行 确定靶值。靶值必须在实验室内使用自己现行的测定方法进行确定。 定值质控品的标定值只能做为确定靶值的参考。①暂定靶值的设定: 为了确定靶值,新批号的质控品应与当前使用的质控品一起进行测 定 。根 据 20次 或 更 多 独 立 批 次 获 得 的 至 少 20次 质 控 测 定 结 果 ,计 算 出 平 均 数 , 作 为 暂 定 靶 值 。 以 此 暂 定 靶 值 作 为 下 1个 月 室 内 质 控 图 的 靶 值 进 行 室 内 质 控 ; 1 个 月 结 束 后 , 将 该 月 的 在 控 结 果 与 前 20个 质 控 测 定 结 果 汇 集 在 一 起 , 计 算 累 积 平 均 数 (第 1个 月 ), 以 此 累 积 的 平 均 数 作 为 下 1个 月 质 控 图 的 靶 值 。 重 复 上 述 操 作 过 程 , 连 续 3 -5 个 月 。 ② 常 用 靶 值 的 设 定 : 以 最 初 20 个 数 据 和 3-5 个 月 在 控 数 汇 集 的 所 有 数 据计算的累积平均数作为质控品有效期内的常用靶值, 以此作为以 并 后室内质控围的平均数。对个别在有效期内浓 度水平不断变化的项

目,则需不断调整靶值。 (2)稳 定 性 较 短 的 质 控 品 :在 3-4天 内 , 每 天 分 析 每 水 平 质 控 品 3-4瓶 , 每 瓶 进 行 2 -3次 重 复 。收 集 数 据 后 ,计 算 平 均 数 、标 准 差 和 变 异 系 数 。 对 数 据 进 行 异 常 值 检 验 。如 果 发 现 异 常 值 ,需 重 新 计 算 余 下 数 据 的 平 均数和标准差。以此均值作为质控图的靶值。 2. 设 定 控 制 限 差倍数表示。 (1)稳 定 性 较 长 的 质 控 品 ① 暂 定 标 准 差 的 设 定 :为 了 确 定 标 准 差 , 新 批 号 的 质 控 品 应 与 当 前 使 用 的 质 控 品 一 起 进 行 测 定 。 据 20次 或 更 多 根 独 立 批 获 得 的 至 少 20 次 质 控 测 定 结 果 , 计 算 出 标 准 差 , 并 作 为 暂 定 标准差。 此暂定标准差作为下1 个月室内质控图的标准差进行室内 以 质 控 ; 1 个 月 结 束 后 ,将 该 月 的 在 控 结 果 与 前 20次 质 控 测 定 结 果 汇 集 在 一 起 , 计 算 累 积 标 准 差 (第 1 个 月 ), 以 此 累 积 的 标 准 差 作 为 下 一 个 月 质 控 图 的 标 准 差 。 重 复 上 述 操 作 过 程 , 连 续 3-5个 月 。 ② 常 用 标 准 差 的 设 定 : 以 最 初 20 次 质 控 测 定 结 果 和 3-5 个 月 在 控 质 控 结 果 汇 集 的 所有数据计算的累积标准差作为质控品有效期内的常用标准差, 以 并 此作为以后室内质控的标准差。 (2)稳 定 性 较 短 的 质 控 品 :至 于 标 准 差 ,你 使 用 的 数 据 量 越 大 ,其 标 准 差 估 计 值 将 更 好 。 由 于 这 个 原 因 , 我 们 并 未 推 荐 使 用 (1) 中 的 重 复 数 据 来 建 立 新 的 标 准 差 。 是 采 用 以 前 变 异 系 数 (CV)来 估 计 新 的 标 准 差 而 ε 以 前 的 标 准 差 是 几 个 月 数 据 的 简 单 平 均 ,甚 至 是 累 积 的 标 准 差 .这 就 考 虑 了 检 测 过 程 中 更 多 的 变 异 。 标 准 差 等 于 (1)的 平 均 数 乘 以 以 前 对新批号质控品应确定控制限, 制限通常以标准 控

变异系数。 (3)控 制 限 的 设 定 :控 制 限 通 常 是 以 标 准 差 的 倍 数 表 示 。 床 实 验 室 不 临 同 项 目 (定 量 测 定 )的 控 制 限 的 设 定 要 根 据 其 采 用 的 控 制 规 则 来 决 定 。 4.更 换 质 控 品 拟 更 换 新 批 号 的 质 控 品 时 , 在 "旧 "批 号 质 控 品 使 用 应

结 束 前 与 "旧 "批 号 质 控 品 一 起 测 定 , 复 "设 定 靶 值 "和 "设 定 控 制 限 " 重 的过程,设立新的靶值和控制限。 5.绘 制 质 控 图 及 记 录 质 控 结 果 ( Westgard 多 规 则 质 控 法 ) ① 方 法 :要 求 在 常 规 条 件 下 ,同 时 测 定 2份 质 控 血 清 ,并 要 求 质 控 血 清 所 含 测 定 物 浓 度 最 好 分 别 为 医 学 决 定 水 平 的 上 限 (高 值 )或 下 限 (低 值 ) ,或 者 是 分 析 方 法 测 定 范 围 的 上 限 和 下 限 。将 测 定 结 果 分 别 绘 成 2份 不 同 浓 度 的 x-s 质 控 图 , 当 有 一 份 质 控 血 清 测 定 值 处 于 质 控 图 上 2S~ 3S 界 限 内 , 发 出 "警 报 "信 号 时 , 即 应 采 用 其 余 各 条 规 则 对 质 控 图 进 行 全 面 检 查 ,若 符 合 其 中 一 条 ,就 应 把 该 批 分 析 测 定 的 结 果 判 为 "失 控 "。 ②判断规则: a: 1 2 S 警 告 规 则 : 当 2份 质 控 血 清 中 的 任 意 1 份 测 定 值 处 于 〒 2S~ 〒 3S 界 限 内 , 为 "警 报 "信 号 。 b: 1 3 S 规 则 :当 2份 质 控 血 清 中 的 任 意 1份 测 定 值 超 过 〒3S 界 限 , 为 "失 控 "提 示 存 在 随 机 误 差 。 c: R 4 S 规 则 :同 一 批 中 两 个 质 控 结 果 之 差 超 出 4s 范 围 , 其 中 一 个 超 出
+2 S 限 值 , 另 一 个 超 出 -2S 限 值 , 为 "失 控 "属 随 机 误 差 过 大 。

d: 2 2 S 规 则 :同 批 两 个 质 控 品 结 果 同 方 向 超 出 〒2S 限 值 , 或 同 一 质 控

品 连 续 两 次 质 控 结 果 超 出 〒2S 限 值 为 "失 控 "多 由 系 统 误 差 造 成 。 e: 4 1 S 规 则 :当 1份 质 控 血 清 的 测 定 结 果 连 续 4次 超 过 +1s 或 -1s 界 限 , 或 2份 质 控 血 清 的 测 定 结 果 同 时 连 续 2次 超 过 +1s 或 -1s 界 限 时 , 为 " 失 控 "一 般 由 系 统 误 差 所 至 。 f: 10 X 规 则 :当 1份 质 控 血 清 测 定 结 果 连 续 10次 偏 于 均 值 一 侧 时 , 或 2 份 质 控 血 清 的 测 定 结 果 同 时 连 续 5次 偏 于 一 侧 时 , 为 "失 控 "是 系 统 误 差所致。

质控数据

否 12S 是 否 否 13S 10X 是 是 失 控 是 是 是 22S 否 R4S 否 41S 否 在控,接受分析批的结果

Westgard 多 规 则 质 控 逻 辑 图

6. 失 控 情 况 处 理 及 原 因 分 析

(1)失 控 情 况 处 理 :操 作 者 在 测 定 质 控 时 , 发 现 质 控 数 据 违 背 了 控 制 如 规 则 ,应 填 写 失 控 报 告 单 ,上 交 专 业 室 主 管 (组 长 ) ,由 专 业 室 主 管 (组 长 )作 出 是 否 发 出 与 测 定 质 控 品 相 关 的 那 批 患 者 标 本 检 验 报 告 的 决定。 (2) 失 控 原 因 分 析 :失 控 信 号 的 出 现 受 多 种 因 素 的 影 响 , 些 因 素 包 这 括操作上的失误、试剂、校准物、质控品的失效,仪器维护不 良以 及 采 用 的 质 控 规 则 、控 制 限 范 围 、一 次 测 定 的 质 控 标 本 数 等 等 。失 控 信号一旦出现就意味着与测定质控品相关的那批病人标本报告可能 作 废 。此 时 ,首 先 要 尽 量 查 明 导 致 失 控 的 原 因 ,然 后 再 随 机 挑 选 出 一 定 比 例 (例 如 5% 或 10% )的 患 者 标 本 进 行 重 新 测 定 ,最 后 根 据 既 定 标 准 判 断 先 前 测 定 结 果 是 否 可 接 受 ,对 失 控 做 出 恰 当 的 判 断 。 对 判 断 为 真 失 控 的 情 况 ,应 该 在 重 做 质 控 结 果 在 控 以 后 , 对相应的所有失控患者标本进行重新测定。 失控信号被判断为假失 如 控时,常规测定报告可以按原先测定结果发出,不必重做。 当得到 失控信号时, 以采用如下步骤去寻找原因: ①立即重新测定同一质 可 控品。此步主要是用以查明人为误 差,每一步都认真仔细地操作, 以 查 明 质 控 的 原 因 ;另 外 ,这 一 步 还 可 以 查 出 偶 然 误 差 ,如 是 偶 然 误 差 ,则 重 测 的 结 果 应 在 允 许 范 围 内 (在 控 )。如 果 重 测 结 果 仍 不 在 允 许 范 围 ,则 可 以 进 行 下 一 步 操 作 。 ② 新 开 一 瓶 质 控 品 ,重 测 失 控 项 目 。 如果新开的质控血清结果正常, 么原来那瓶质控血清可能过期或在 那 室温放臵时间过长而变质,或者被污染。如果结果仍不在允许范围, 则进行下一步。③新开一批质控品,重做失控项目。如果结果在控,

说 明 前 一 批 血 清 可 能 都 有 问 题 ,检 查 它 们 的 有 效 期 和 贮 存 环 境 ,以 查 明 问 题 的 所 在 。如 果 结 果 仍 不 在 允 许 范 围 ,则 进 行 下 一 步 。 ④ 进 行 仪器维护,重测失控项目。检查仪器状态,查明光源是否需要更换, 比 色 杯 是 否 需 要 清 洗 或 更 换 ,对 仪 器 进 行 清 洗 等 维 护 。另 外 还 要 检 查 试 剂 ,此 时 可 更 换 试 剂 以 查 明 原 因 。如 果 结 果 仍 不 在 允 许 范 围 ,则 进 行下一步。 ⑤重新校准,重测失控项目。用新的校准液校准仪器, 排除校准液的原因。 ⑥请专家帮助。如果前 5 步都未能得到在控结果,那可能是仪器或 试剂的原因,只有和仪器或试剂厂家联系请求他们的技术支援了。

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生化室作业指导书

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凯美雅生化分析仪操作规程

凯美雅生化分析仪操作规程
1 目的 确 保 生 化 分 析 仪 的 有 效 运 行 、控 制 系 统 误 差 、减 少 偶 然 误

差,使结果准确、可靠。 2 3 4 4.1 范围 职责 适用于凯美雅生化分析仪。 责任人为临床化学实验室工作人员。

日常的工作流程 仪器开机前的准备工作:

4.1.1 确 认 所 有 的 电 气 连 接 是 否 正 常 。 4.1.2 检 查 并 灌 注 相 应 桶 中 的 蒸 馏 水 和 清 洗 液 。 4.1.3 检 查 样 品 臂 、 样 品 针 、 试 剂 臂 和 搅 拌 棒 是 否 在 正 确 的 位 臵 。

4.1.4 打 开 仪 器 右 面 的 电 源 “ POWER” 开 关 , 然 后 在 打 开 仪 器 左 面 的 工 作 开 关 “ OPERATION” 开 关 。 4.1.5 打 开 计 算 机 , 过 一 分 钟 左 右 在 打 开 运 用 软 件 。 4.1.6 初 始 化 后 执 行 光 度 计 的 自 动 增 益 测 试 。 4.1.7 自 动 增 益 测 试 全 部 合 格 后 方 可 进 行 测 试 全 部 变 绿 即 为 合 格 ) ( 。 然 后 进 行 质 控 测 试 ,质 控 若 在 控 ,方 可 进 行 患 者 标 本 进 行 测 试 ,质 控 判断见室内质控操作规程。 4.2 运行测试进行中的两个注意事项操作: 在 测 试 过 程 中 ,如 有 急 症 标 本 或 向 样 品 盘 中 加 样

4.2.1 暂 停 加 样

应 让 样 品 针 暂 停 ,以 避 免 碰 到 样 品 针 ,可 点 击 暂 停 加 样 键 。大 约 1 分 钟 后 样 品 针 停 下 ,屏 幕 显 示 加 样 已 暂 停 。然 后 向 样 品 盘 放 臵 样 品 ,急 症样品在测试位臵打“√” 急症优先测试。点击继续加样键,接着 , 开始测试。 4.2.2 运 作 中 急 停 在运行过程中机器突然出现问题,需要停止测

试 时 ,可 立 即 点 击 停 止 测 试 键 即 可 。点 击 后 系 统 将 发 出 询 问 ,用 户 确 认 是 否 停 止 测 试 。若 是 ,则 样 品 分 析 将 立 即 停 止 ,仪 器 开 始 从 比 色 杯 中 清 除 混 合 物 ,该 过 程 约 为 5 分 钟 。在 仪 器 和 软 件 的 固 有 的 冲 洗 完 成 后,仪器和应用软件应重新启动。 4.3 日 常 操 作 完 毕 的 维 护 保 养 每日测试完毕,均需进行比色杯清

洗,然后进行储水浸泡。清理试剂藏和样品藏。 5. 维护保养

5.1 每 日 维 护 保 养 项 目 :

? 工作开始时:装满蒸馏水、清洗液、进行比色杯的清洗 ? 工作结束时:进行比色杯的清洗、储水浸泡、清理试剂藏、清理 样品藏、倾倒废液、清洁工作区域 5.2 周末维护保养项目:

? 用蘸有酒精的棉签对样品针、试剂针进行清洁。擦拭仪器表面。 ? 对蒸馏水桶、废液桶进行一次清洗 5.3 每月保养项目

? 清洁清洗站喷嘴、吸嘴、干燥头 ? 用 1M 的 HCL 和 1M NaOH 对 比 色 杯 进 行 一 次 酸 碱 清 洗 。 5.4 每年维护保养:

? 每年请厂家应对生化分析仪至少进行一次就鉴定和校准,是仪器 的性能状态符合仪器的质量标准。当仪器维修特别是仪器的加样 系统或者比色系统进行维修时,应立即进行仪 器的校准。 ? 检查各项目的分析参数的设臵是否最佳,确保仪器的精密度及线 性 达 到 仪 器 的 性 能 要 求 ,检 查 比 色 杯 的 清 洁 及 磨 损 情 况 、灯 泡 的 状态,必要时更换灯泡和比色杯、清洗管道。 6 生化分析仪的校准: ? 用校准品进行校准: 用仪器厂商配套的检测系统 试剂及校准品) ( 进行相应测定项目的校准。非配套检测系统的校准应可溯源。用 校准品进行校准应注意如下的问题:选择合适的校准品,校准品 应可溯源;根据试验项目确定校准频度,每 6 个月至少进行一次

校准;室内质量控制出现异常的趋势或者偏移时的项目应重新校 准;绝不可用值质控品来对仪器进行校准操作。 ? 用实际 K 值进行校准 迄今为止,多数的仪器还是用理论的 K

值进行计算。一个物质的摩尔吸光度是一个定值,而理论 K 值的 计算与物质的摩尔吸光系数、光径、样本及试剂加注量等因素有 关,在不同的检测系统,由于仪器的性能不一特别是加样系统的 误差、分光系统的误差、干涉滤光片或光栅的半波宽度偏大导致 的杂光及多波长同时使用等使仪器达不到理论的最佳状态,从而 导致该仪器的理论 K 值和实际 K 值不一致。因此不宜直接使用理 论 K 值进行计算。如果使用厂家配套的检测系统,厂家提供的 K 值实际上是该检测系统的 K 值,可以直接使用。另外注意,特别 是仪器维修或更换了重要的部件时,实际 K 值不同。


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